实用指南！动物源性食品中利巴韦林如何检测？

　　利巴韦林又名病毒唑、三氮唑核苷、尼斯可等，是广谱强效的抗病毒药物，因具有溶血性贫血、遗传毒性和生殖毒性等副作用，我国早在2005年就明令禁止利巴韦林等人用抗病毒药兽用。近年来利巴韦林也成为国家食品安全监督抽检的重要项目。

　　目前利巴韦林常用的检测方法为《SN/T 4519-2016 出口动物源食品中利巴韦林残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》，迪马科技参考相关标准，优化方法过程，采用新推出的PBA固相萃取柱产品，结合耐纯水的Spursil C18-EP极性改性液相色谱柱，推出鸡肉和鸡肝中利巴韦林检测方法。该方法具有回收率高、稳定性好、净化效果优异等特点，可供广大分析工作者参考。

本方案适用于鸡肉、鸡肝等动物源性食品中利巴韦林的检测。

(1) 利巴韦林储备液1.0mg/mL：准确称取适量标准品，用甲醇配制成利巴韦林1.0mg/mL的储备液；

(2) 利巴韦林中间液：分别吸取适量单标储备液，用甲醇配制成1.0μg/mL 和0.05μg/mL的中间液；

(3) 利巴韦林-¹³C₅内标储备液100.0μg/mL：利巴韦林-¹³C₅，甲醇配制，直接购买的储备液；

(4) 利巴韦林-¹³C₅内标中间液：吸取适量内标储备液，用甲醇配制成0.1μg/mL中间液。

(1) 称取5g样品，加入利巴韦林-¹³C₅内标中间液100μL，12mL三氯乙酸提取液(pH 4.8)^*，和2.5mL乙腈，振荡提取10min，6000rpm离心2min，取上清液；

(2) 下层残渣再用10mL三氯乙酸提取液(pH 4.8)，重复提取一次；

(3) 合并两次提取液，并定容至25mL，取出5mL。

^*三氯乙酸提取液(pH 4.8)：称20g三氯乙酸，加入950mL水溶解，用氨水调节pH至4.8，用水定容至1000mL。

(1) 5mL提取液加入1mL 2mol/L乙酸铵(pH 4.8)^*，加入100μL酶^*，涡旋混合1min，放入37℃烘箱加热反应2h。

(2) 酶解完成后，拿出冷却到室温，加入氨水，调节pH至8.5，混匀，6000rpm离心2min，取出上清液待净化。

^*2mol/L乙酸铵(pH 4.8)：称取7.7g乙酸铵，加入45mL水溶解，然后用乙酸调节pH至4.8；

^*酶溶液的配制：固体酶制剂：酶活度：10.4u/mg磷酸酯酶，取适量酶制剂，用水稀释至酶活0.04u/mL。

ProElut PBA  100mg/3mL (Cat.# 68403)

(1)活化：依次用3mL乙腈、3mL乙腈-1%甲酸水*、3mL乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5)*活化；

(2)上样：加入待净化液，弃去流出液；

(3)淋洗：依次用5mL 10%乙腈-乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5)*、2mL 5%氨水甲醇淋洗，弃去流出液，小柱真空负压抽干0.5min；

(4)洗脱：加入2mL 0.5%甲酸水，抽干小柱，接收全部流出液混匀，过Nylon膜(Cat#：37177)上机分析。

*乙腈-1%甲酸水：乙腈:1%甲酸水(体积比3:1)；

*乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5)：称取3.85g乙酸铵，加入180mL水溶解，然后用氨水调节pH至8.5；

*10%乙腈-乙酸铵缓冲溶液(pH 8.5)：乙腈:pH 8.5乙酸铵缓冲溶液(体积比1:9)。

UPLC 条件

色谱柱：Spursil C18-EP, 150x2.1mm, 3μm  (Cat#：82113)

流  速：0.4mL/min

进样量：10μL

柱 温：35℃

流动相：A: 0.2%甲酸水  B: 乙腈

梯度

质谱条件

电离模式：ESI 

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi 

离子源温度：500℃