流式样本制备Ⅱ：一学就会！小鼠淋巴结&胸腺单细胞悬液制备全流程

①通过FSC-A/SSC-A圈出淋巴细胞主群（图A.R1）；

②用FCS-A/FCS-H去除粘连体信号，分析单细胞（图A.R2）

③圈出活性的T细胞：LD/B220^-CD3⁺（图A.R3 ），在T细胞中圈出CD3⁺CD4⁺的细胞群（图A.R4）；

④通过共表达高水平的CXCR5和PD1来鉴定Tfh细胞（图B）；

⑤Tfh细胞高表达CD44和CXCR5（图C.左），并且转录因子Bcl6高表达（图C.右）。

① 颈椎脱臼法处死小鼠，在解剖台上固定小鼠（图A）；小心剪开小鼠整个腹部皮肤，暴露出小鼠腹膜（图B）；

② 切除腹壁；小心地切开隔膜（如箭头所示），而不损伤血管、肝脏或胆囊（图C）；

③ 在不损害血管、肝脏、肺或心脏的情况下切除胸腔，暴露胸腺；胸腺用箭头标记（图D）；

④ 将胸腺置于预冷的PBS中浸泡待用；

②在淋巴细胞群（G0）中，通过FSC-A/FSC-H(图B)和SSC-A/SSC-W（图C）排除粘连体；使用死活染料圈出活细胞群体（G3）（图D）；

③在活细胞中，圈出CD4⁺CD8^-细胞群（图E.G4）；随后展示FOXP3和CD25表达情况，区分两群Treg前体细胞（图F.G5&G6）和Treg细胞（图F.G7）；

④胸腺Treg细胞可分为CD24^highCD69⁺的未成熟细胞（图G.G9）；和CD24^dim/lowCD69^-的成熟细胞（图G.G8）；

⑤CD4SP细胞也可分为CD24^highCD69⁺的未成熟细胞（图H.G10）和CD24^dim/lowCD69^-的成熟细胞（图H.G11）。