细胞膜红色荧光探针

DiI (细胞膜红色荧光探针)

规格: 10mg

保存: -20℃干燥避光保存，有效期 1 年。

产品描述:

‍  DiI 即 DiIC18(3) ，全称为 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。 

  DiI 是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。 DiI 在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI 被激发后可以发出橙红色的荧光，DiI 和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱：最大激发 波长为 549nm，最大发射波长为 565nm。 

  DiI 被广泛用于正向或逆向的、活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂 (long-termtracer)。DiI 通常不会影响细胞的生存力(viability)。被 DiI 标记的神经细胞在体外 培养的条件下可以存活长达 4 周，在体内可以长达一年。 

  具有相同功能的同一族亲脂性的荧光染料还有：DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS，它们的荧 光颜色区分明显：DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和 DiR （深红色 荧光）这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI 和 DiO 可以分别用标准 的 FITC 和 TRITC 的滤光片。DiD 可以用 633 nm He–Ne 激光器激发，有着比 DiI 更长的 激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiR 的红外荧光可以穿透细胞和组 织，在活体成像中用来示踪。

产品性质：

使用方法

1. 染色液制备

（1）配置 DMSO 或 EtOH 储存液：储存液用 DMSO 或 EtOH 配置浓度 1～5 mM。分装储存在-20℃，避免反复冻融。

（2）工作液制备：用适当缓冲液（如：无血清培养基，HBSS 或 PBS）稀释储存液，配制浓度为 1～5 μM 的工作液。

【注】工作液最佳浓度应根据不同细胞系和实验体系来优化。

2. 悬浮细胞染色

（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为 1×10⁶/mL。

（2）37℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

（3）孵育结束，按 1000～1500 rpm 离心 5min。

（4）倾倒上清液，再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。

（5）重复（3），（4）步骤两次以上。

3. 贴壁细胞的染色

（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

（3）在盖玻片的一角加入 100μL 的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

（4）37℃孵育细胞 2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2～3 次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育 5～10min，然后吸干培养基。

4. 显微镜检测

（1）DiD，DiO，DiI，DiR 和 DiS 滤光器的选择参见表 1。

（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a) DiI 和 DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI 和 DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO 和 DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式细胞仪检测

经 DiO，DiI，DiD 和 DiR 染色的细胞可分别用流式细胞仪的 FL1，FL2，FL3 或 FL4 通道检测。

注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！