总RNA提取试剂盒

总 RNA 提取试剂盒

Total RNA Extraction Kit

规格：100ml‍

保存条件：

4℃避光密闭保存，保质期 12 个月。

产品简介：

总 RNA 提取试剂盒是基于 TriZol 原理制备的一种通用总 RNA 提取试剂，采用优化的裂解液配方，裂 解能力强，具有广泛的样本适应性。该方法简便、快捷，适用于动植物细胞、组织、酵母细胞以及细菌的 总 RNA 抽提。其原理是利用异硫氢酸胍/酚/氯仿法，快速裂解细胞，溶解细胞内含物，抑制核酸酶活性， 从而有效防止 RNA 在提取过程中的降解。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相。RNA 保留在上层水相中， 分离后可用异丙醇沉淀回收。本产品提取的总 RNA 产量大、纯度高，无基因组 DNA 和蛋白质污染，可直 接用于 RT-PCR、Northern blot、dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护实验和分子克隆等一系列 操作。

注意事项：

1. 试剂中含有苯酚等有害物质，应在通风橱内操作并使用个人防护用品如实验服、手套、防护眼镜或面具等，防止皮肤接触和吸入。

2. 预防 RNase 污染：

1）采用无菌操作规程；经常更换新手套，防止样品由于皮肤携带的细菌、真菌而导致的 RNase 污染。

2）使用经 DEPC-ddH2O 处理过的塑料容器和枪头，避免交叉污染。

3）RNA 在提取液 中不会被 RNase 降解。但后续处理过程中应使用不含 RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在 150℃烘烤 4 h，塑料器皿可在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 min，然后用水彻底清洗后灭菌烘干使用。此外，使用 Rnase 清除剂对实验器皿、实验仪器和工作台面进行处理，可有效去除RNase，提高工作效率。

4）配制溶液应使用无 RNase 的水（制备方法：在去离子水中加入终浓度为 0.05％（v/v）的 DEPC，充分混合，室温或 37℃放置过夜，高温高压灭菌）。

5）实验前需准备的试剂：RNA 实验专用的氯仿、异丙醇、75％乙醇（DEPC-ddH2O 配制）、DEPCddH2O 或 TE 缓冲液（DEPC-ddH2O 配制）。

6）匀浆后加氯仿前，样品可在-80℃放置一个月以上；溶解在 75％乙醇中的 RNA 可在 4℃保存一周或-20℃保存一年。

操作流程：

1. 细胞裂解

组织样本：

提取液用量：每 50-100 mg 组织加 1 ml 提取液，样品体积不应超过提取液体积的 10％。

1） 将动物或植物组织切成小块，在液氮中磨碎或用匀浆器匀浆处理。

2） 将研磨好的组织粉末快速转入装有 1 ml 提取液的 2 ml 离心管中，在涡旋振荡器上迅速振荡混匀，置于冰上，待所有的样品研磨完。

3） 裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。对于富含蛋白、脂肪或多糖物质的组织样品如肌肉、脂肪组织和植物结节部位等，匀浆后仍会存留有不溶物质，可于 4℃ 12,000 x g 离心 10 min，然后吸取上清至一新的离心管中。

细胞样本：

1） 贴壁细胞：吸尽培养液，每 10 cm² 培养面积（6 孔板单孔或 35 mm 平皿）加入 1 ml 提取液，用加样器吹打数次，以确保细胞完全裂解，然后转移至离心管中。

注：提取液的使用量应由培养皿表面积决定，而非由细胞数目决定。提取液量不足可能导致提取的 RNA中有 DNA 污染。

2） 悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每 5-10×10⁶ 动植物或酵母细胞，或每 1 × 10⁷ 细菌细胞加入 1 ml 提取液，用加样器吹打，使其完全裂解，然后转移至离心管中。

注：添加提取液前切勿洗涤细胞，以免 RNA 降解。必要时可以用匀浆器来裂解某些细菌或者酵母细胞。

2. 液相分离

1） 裂解产物于室温放置 5 min，使核酸-蛋白复合物完全分离。（注：此时样品可在-80℃长期保存。）

2） 每 1 ml 提取液 加入 0.2 ml 氯仿，盖紧管盖，剧烈振荡 15 s，室温放置 2-3 min。

3） 4℃ 12,000 x g 离心 15 min，样品会分成三层：桔黄色的下层有机相，中间层和无色的上层水相。

4） 吸取含总 RNA 的上层水相至一新的离心管中，吸取水相的体积为所用提取液 试剂的 60％。

3. RNA 回收

1） 按照每 1 ml 提取液 的最初使用量加入 0.5 ml 异丙醇，颠倒数次混匀，室温放置 10 min。

2） 4℃ 12,000 x g 离心 10 min，弃除上清，可见胶状的 RNA 沉淀。

3） 按照每 1 ml 提取液 的最初使用量加入 1 ml 75%乙醇，颠倒数次混匀，洗涤沉淀。

4） 4℃ 12,000 x g 离心 5 min，弃除上清。

5） 室温倒置 5-10 min 晾干或真空抽干（不要使用真空干燥离心机，以免 RNA 过干，难以溶解）。

6） 加入适量（如 25 μl） DEPC-ddH2O 或 TE 缓冲液，用加样器吹打数次溶解 RNA。

7） 通过 RNA 电泳以及紫外分光光度计检测，确定 RNA 的浓度、纯度和完整性。

8） 所得的 RNA 应立即使用或适量分装后-80℃保存，避免反复冻融。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！