2×预混实时荧光定量快速PCR反应体系（含ROX）

2× qPCR Green Fast Mixture

2× 预混实时荧光定量快速 PCR 反应体系

【产品简介】

  本产品采用Sybrgreen 嵌合荧光法进行荧光定量的专用试剂。制品中含有荧光定量反应的最适浓度 Sybrgreen，是一种2×浓度的预混试剂，进行实验时，PCR 反应液的配制十分方便简单。制品中使用了 antiTaq 抗体的Hot Start 法用DNA 聚合酶，与荧光定量反应适合Buffer 组合，可以有效抑制非特异性的 PCR 扩增，大大提高PCR 的扩增效率，可以进行高灵敏度的荧光定量扩增反应。另外，本产品中添加了 Tli RNaseH (耐热性RNaseH)，以cDNA 作为模板进行PCR 反应时，可以很好地抑制由于cDNA 中残存 mRNA对PCR 反应造成的阻害作用。适合于快速荧光定量扩增反应，可以在宽广的定量区域内得到良好的 标准曲线，对靶基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。

【规格和组分】

【保存】-20℃恒温避光保存两年，避免反复冻融。如经常使用，可置于 4℃保存至少六个月。

‍【注意事项】‍

1. 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免气泡，并经短暂离心后使用。

2. 尽可能减少 qPCR Green Fast Mixture 在光下的曝露时间，长时间的曝光可导致荧光信号减弱。

3. 反应液的配制、分装请一定使用无污染的枪头、Microtube 等，尽量避免交叉污染。

【使用方法】

用户需自备的试剂：cDNA 模板或 DNA 模板、引物、ddH2O 等。

请按照不同品牌荧光定量 PCR 仪的使用说明书要求进行试验操作。

操作示例：分别以 20ul 和 50ul PCR 反应体系为例

1. PCR 反应体系的建立：

1. 模板量：10~100 ng 基因组 DNA，或 1~10 ng cDNA 为参照，因不同物种的模板中含有目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。另外，two Step RT-PCR 反应的 cDNA（RT 反应液）作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。

2. 引物：通常引物浓度以 0.2uM 可以得到较好结果，可以终浓度 0.1~1.0uM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系，

3. 不同仪器所需 ROX Reference Dye 不同，或需要添加或不需要添加，请根据仪器说明进行操作。

4. 按照各仪器推荐体系进行反应液配制。

2. PCR 反应条件的设置

本产品是利用anti-Taq 抗体的Hot Start 用 DNA 聚合酶，与其他公司的化学修饰型 Hot Start 用DNA 聚合酶相比，不需要 PCR 反应前的 95℃、5～15 分钟的酶的活性化反应。如果高温处理时间过长，会使酶的活性下降，其 PCR的扩增效率、定量准确度等都会受到影响。 如果在PCR 反应前进行模板的预变性，通常设定为 95℃、30 秒。

  以上举例为常规qPCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件，并根据此比例放大或缩小反应体系。如果以上两步法程序得不到良好的实验结果时，请再进行 PCR 条件的优化。由于使用 Tm 值较低的引物等原因，两步法PCR 反应扩增性能较差时，可以尝试进行三步法 PCR 扩增反应。

3. 标准曲线制作和结果分析

反应结束后确认荧光定量PCR 的扩增曲线和融解曲线，进行 PCR 定量时制作标准曲线等。

分析方法参见仪器的操作手册。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任，仅限于此产品的价值本身。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！