线粒体提取试剂盒

线粒体提取试剂盒

Mitochondria Isolation Kit

产品规格：50T

产品组成及保存条件：

保质期：有效期 1 年。

产品介绍：

  线粒体是半自主性细胞器，不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷（ATP）的主要场所，为细胞的活动提供能量，而且在许多生命活动中具有重要调控作用。因此，准确和全面分离保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。

  利用专门试剂温和匀浆组织和细胞，再采用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体；利用专门试剂，配合超声波破碎线粒体，可以得到保持活性的线粒体酶。

 线粒体提取试剂盒 (Mitochondria Isolation Kit) 用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的分离提取。其制备物产量高，可用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。本产品仅用于科研领域，不用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1. 低温离心机、匀浆器

2. PBS

提取步骤

1. 清洗：取新鲜组织（不宜采用冻存的组织），准确称取约 0.1g 组织或收集约 500 万细胞，用预冷的 PBS 清洗一次，冰上剪成 3mm2 大小的组织碎片。

2. 匀浆裂解：加入 10 倍体积的预冷 Mitochondria Lysis buffer（如需获得细胞浆蛋白，应提前加入PMSF，至 PMSF 浓度为 1×），置于冰浴上，用匀浆器或研钵研磨。

3. 离心：4℃，600g 离心 5min 以去除细胞核、未破碎的细胞核大的膜碎片。注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为 2000g 离心 3min，相应的相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。

4. 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，4℃，12000g 离心 10min。注：如需获得纯度更高的线粒体，可以将此步骤的离心速度改为 6000g 离心 10min，相应的相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。

5. 上清液即胞浆提取物，可用于研究细胞浆蛋白或线粒体蛋白向胞浆的释放。沉淀为完整线粒体。含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能。可用于线粒体的生理功能等方面的研究。

6. 在沉淀中加入 200uL 和 2uL 100mM PMSF，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），可用于线粒体酶活性测定。

7. 在沉淀中加入 200uL 和 2uL 100mM PMSF，超声波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），可用于线粒体蛋白浓度测定。

注意事项

1. 分离线粒体和提取线粒体蛋白质的所有步骤均需在冰上或 4℃进行，所用溶液需冰浴或 4℃预冷。

2. 通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取 600g 和 12000g，如果希望纯度更高，但对线粒体的得率要求不高，前后两次离心速度可以采用 2000g 和 6000g。

3. 试剂（如 PMSF）对于不同实验不必全部使用，在实验条件成熟后也可以不必使用。

4. 如果不是用于制备线粒体蛋白，PMSF 不必使用；如果用于制备线粒体蛋白样品，需要添加 PMSF。PMSF 一定要在试剂计入到样品中前 1~2min 内加入，以免 PMSF 在水溶液中很快失效。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！