磷酸钙法细胞转染试剂盒

磷酸钙法细胞转染试剂盒

产品规格：200T‍

保存条件: -20℃保存，有效期12个月。

产品简介：

   外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质 体法、电穿孔法、显微注射法等。磷酸钙法细胞转染试剂盒(Calcium Phosphate Cell Transfection Kit)是在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效率，并 降低了毒性，可用于磷酸钙法转染细胞，不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定株。HEK293 是最适合磷酸钙法转染的细胞之一，优化条件后转染效率可以高达 85%以上，一般的转染效 率可达 40～50%左右。其他常见细胞(例如 Hela、CHO 细胞等)也适合磷酸钙法转染，但效率 比 293 细胞要略低一些。 本转染试剂盒主要适合于大多数贴壁细胞的转染，也可于一些悬 浮细胞的转染，一般要求 DNA 浓度在 10～50μg 为宜，Hela、BALB 等细胞沉淀放置 16h， CHO、DUKX、BⅡ等细胞可以通过甘油、DMSO 进行热休克处理以提高转染效率。

  本产品仅用于科研，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

自备材料：

1. 胰蛋白酶消化液

2. 完全培养基

3. PBS

4. 无菌水

操作步骤(仅供参考)：

(一)贴壁细胞转染：

1. 在转染前 24h 用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中，待细胞密度达 70~80% 即可进行转染。后续操作步骤均按 6 孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。

2. 在加入 DNA 之前 2~4h，加入不含抗生素的完全培养液，置于 CO₂ 培养箱培养，37℃，5% CO₂。

3. 取 2~6ug DNA(体积不宜超过 20μl)加入 100ul Calcium chloride solution 混匀即为DNA-CaCl₂ 溶液。 

4. 取 BBS solution 100μl，用移液器一边吹打 BBS solution，一边逐滴加入 DNA-CaCl₂溶液(操作缓慢，一般在 1～2min)。

5. 室温静置 20~30min，即为 DNA-CaCl₂-BBS 溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。

6. 取 DNA-CaCl2-BBS 溶液底部物质均匀加入到 6 孔板细胞中，轻轻晃动混匀。

7. 置于 37℃ 5% CO2 培养箱培养 4~16h。如果培养细胞为 CHO、DUKX 等，可以 DMSO或甘油进行休克处理，转染效率会大大增加，即培养后，用 2ml 含 10%甘油或 20%DMSO的完全培养液替换当前培养液，室温下静置，加 PBS 摇动混匀。

8. 去除培养液，用 PBS 清洗细胞 2 次，加入完全培养液继续培养，一般 24h 后可见转染细胞的表达。

(二)悬浮细胞转染：

1. 低速离心收集悬浮细胞，用 PBS 洗涤 1 次。

2. 取 2~6ug DNA(体积不宜超过 20μl)加入 Calcium chloride solution，混匀，即为 DNACaCl₂溶液。

3. 取 BBS solution 100μl，用移液器一边吹打 BBS solution，一边逐滴加入 DNA-CaCl₂溶液(操作缓慢，一般在 1～2min)。

4. 室温静置 20~30min，即为 DNA-CaCl₂-BBS 溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。

5. 每 10⁶ 个细胞沉淀用 100ul DNA-CaCl₂-BBS 溶液重新悬浮，室温放置 20~30min。

6. 6 孔板每孔加入 2ml 不含抗生素的完全培养基，取 DNA-CaCl₂-BBS 溶液底部物质均匀加入到 6 孔板中，轻轻晃动混匀。

7. 置于 37℃ 5% CO2 培养箱培养 4~16h，去除培养液，用 PBS 清洗细胞 2 次，加入 2ml完全培养液继续培养，一般 24h 后可见转染细胞的表达。

注意事项：

1. 注意无菌操作，尽量避免污染，同时 DNA 不应含有蛋白和酚。

2. 休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高，但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。

3. 转染 12～24h 后，可以加入终浓度为 10mmol/L 的丁酸钠溶液，可以提高病毒滴度。

4. BBS solution 的 pH 值直接关系到转染效率，尽量避免长时间暴露在空气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！