细胞裂解液

细胞裂解液（Tris-HCl）

Cell Lysis buffer(Tris-HCl)

规格：‍100ml，500ml‍

储存条件：-20ºC 保存，一年有效。

产品描述:

Tris-HCl 细胞裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液，是一种相对温和的细胞裂解液，适用于提取细胞可溶性蛋白。本产品裂解细胞获得的裂解产物，可用于 PAGE，蛋白印迹（Western Blot），免疫沉淀(immnolprecipitation，IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白与多肽的分离纯化。

本产品的主要成分为 Tris、EDTA、蔗糖，如果实验需要，需另行自备 PMSF 等蛋白酶抑制剂。裂解蛋白产物，可以用博奥森生产的 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。

使用说明：

1. 培养细胞

（1）取出细胞裂解液，待融化后，颠倒混匀数次，可适量分装冻存。如果实验需要，按比例加入 PMSF（使其最终浓度为 1mM）或其他蛋白酶抑制剂，混匀，立即使用。

（2）贴壁细胞，去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2-3 遍 (如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)。按 6 孔板每孔加入 100-200 微升的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞数秒后细胞就会被裂解。

（3）悬浮细胞，收集培养细胞，离心去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2-3 遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)，用手指把细胞用力弹散，按 6 孔板每孔细胞加入 100-200 微升的比例加入裂解液。如果细胞数量较大，应按 50-100 万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加裂解液。用手指轻弹管底以促进裂解液和细胞充分接触，裂解完全时应无明显的细胞颗粒。

（4）裂解物经 10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

（5）裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加入 100 微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 150 微升或 200 微升。

2. 组织样品

取 Ep 管，分别称重标记，把组织剪切成小块装入 Ep 管中，称重。按每 20 毫克组织加 100-200 微升的比例加入裂解液(如裂解不完全，可以适当增加裂解液的用量；如需要的蛋白样品浓度较高，可以适当减少裂解液的用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约 1 分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

如果组织样品本身非常细小，如淋巴细胞，可直接加入裂解液裂解，通过振荡（Vortex）以使样品裂解完全。

注意事项：

1. 为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。

2. PMSF 不稳定，应现用现加。

3. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

4. 部分蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健结构咨询。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！