Western及IP细胞裂解液（非变性）

Western 及 IP 细胞裂解液

WIP

产品规格: 30ml，60ml，100ml

保存条件：-20ºC 保存，一年有效。

产品描述: 

WIP 组织细胞裂解液(Tissue and Cell lysis solution for Western Blot and Immunoprecipitation )，是一 种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本产品裂解细胞获得的裂解产物，可用于 PAGE，蛋白印迹（Western Blot），免疫沉淀(immnolprecipitation，IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白与多肽的分离纯化。 

WIP 裂解液的主要成分为 Tris(pH 7.5，20mM)，150mM NaCl，去垢剂 Triton X-100 以及多种蛋白酶 抑制剂,无需自备 PMSF 等蛋白酶抑制剂。WIP 不仅可以用于细胞培养物的裂解，也可直接用于大多数动物 组织的裂解。在有效地裂解组织和细胞的同时，可强烈地抑制蛋白、多肽的降解，并保持原有的分子结构 和蛋白间相互作用。 

用WIP裂解得到的组织细胞蛋白样品，可以用博奥森生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。 由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不能用 Bradford 试剂盒测定由本裂解液裂解得到样品的蛋 白浓度。

产品组成：

使用说明：

1. 培养细胞

（1）取出 WIP 裂解液，待融化后，颠倒混匀数次，适量分装冻存。在使用前取出，按比例加入 PMSF（使其最终浓度为 1mM），混匀，立即使用。

（2）贴壁细胞，去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2-3 遍 (如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)。按 6 孔板每孔加入 100-200 微升的比例加入 WIP。用枪吹打数下，使 WIP 和细胞充分接触。通常 WIP 接触细胞数秒后细胞就会被裂解。

（3）悬浮细胞，收集培养细胞，离心去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2-3 遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)，用手指把细胞用力弹散，按 6 孔板每孔细胞加入 100-200 微升的比例加入 WIP。如果细胞数量较大，应按 50-100 万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加 WIP。用手指轻弹管底以促进 WIP 和细胞充分接触，裂解完全时应无明显的细胞颗粒。

（4）裂解物经 10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

（5）裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加入 100 微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 150 微升或 200 微升。

2. 组织样品

取 Ep 管，分别称重标记，把组织剪切成小块装入 Ep 管中，称重。按每 20 毫克组织加 100-200 微升的比例加入 WIP(如裂解不完全，可以适当增加 WIP 的用量；如需要的蛋白样品浓度较高，可以适当 减少 WIP 的用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约 1 分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 

如果组织样品本身非常细小，如淋巴细胞，可直接加入 WIP 裂解，通过振荡（Vortex）以使样品裂解 完全。

注意事项：

1. 为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。

2. PMSF 不稳定，应现用现加。

3. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

4. 蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健结构咨询。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！