BCA蛋白定量试剂盒

BCA 蛋白定量试剂盒

BCA Protein Assay Kit

产品规格: 40mL(200T), 100mL(500T), 100mL×10(5000T)

保存条件：参照产品组成表

产品组成：

BCA 法是常用蛋白浓度测定方法之一。BCA 蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)实现了蛋白浓 度测定简单、稳定性高、灵敏度高和兼容性高的特点。 

碱性条件下，蛋白将 Cu²⁺还原为 Cu⁺，Cu⁺与 BCA 试剂形成紫颜色的络合物，测定其在 562nm 处的吸 收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 

在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂 SDS，Triton X-100，Tween 不影响检测结果，但受螯合剂 (EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景 值较高，可试用生产的 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。

产品特点：

1. 准确灵敏，线性范围广：BCA 试剂的蛋白质测定范围是 10-2000μg/mL。

2. 快速：45 分钟内完成测定，比经典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。

3. 经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。

4. 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。

5. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝。

使用说明：

1. 稀释蛋白标准品：

取 10μL 标准品用 PBS 稀释至 100μL（标准品一般可用 PBS 或 0.9%NaCl 稀释），使终浓度为 0.5mg/mL。

2. BCA 工作液配置:

根据标准品和样品数量，按体积比 A:B(50:1)配制适量 BCA 工作液，充分混匀。BCA 工作液室温仅可保存 24 小时。

3. 蛋白浓度测定：

①将标准品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μL 加到 96 孔板的蛋白标准品孔中，加 PBS 补足到 20μL，相当于标准品浓度分别为 0, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL。

②对样本做适当稀释，加适当体积样品到 96 孔板的样品孔中，加 PBS 补足到20μL（对样本稀释尽量多做几个梯度，如 2 倍、4 倍、8 倍等；蛋白样品与标准品保证使用相同溶液）。

③各孔加入 200μL BCA 工作液，37℃放置 30 分钟。

④用酶标仪 562nm 测定 OD 值。

⑤根据标准曲线计算出蛋白浓度。

注意事项：

1. 在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或 37℃温育使溶解, 如发现细菌污染则应丢弃。

2. 样品中若含有 EDTA、EGTA、DTT、硫酸铵、脂类会影响检测结果，请试用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒；高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用 TCA 沉淀去除干扰物质。

3．要得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔, 每次均应做标准曲线。

4．当试剂 A 和 B 混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失，工作液在密闭情况下可保存 1 周。

5．需准备 37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为 540-595nm 之间，562nm 最佳。酶标仪需与 96 孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水粉蒸发影响检测结果。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！