大鼠钙结合蛋白D28K即用型免疫组化试剂盒

Rat Calbindin Ready-To-Use IHC Kit

大鼠钙结合蛋白 D28K 即用型免疫组化试剂盒

样本类型：PFPE 组织切片 

产品规格: 50T （包含一个对照切片） 

保存条件：见下表。有效期 6 个月。

产品组分及规格

背景

Calbindin-D-28K (also termed vitamin D-dependent calcium-binding protein, or cholecalcin), is a highly conserved 28kDa calcium binding protein, with broad tissue distribution. It belongs, together with calmodulin, S-100, parvalbumin, troponin C and other proteins, to a family of low molecular weight calcium-binding proteins (CaBPs). These CaBPs have homologous primary structures, which contain conserved polypeptide folds of the EF-hand type for Ca2+ binding. Calbindin-D-28K is found predominantly in subpopulations of central and peripheral nervous system neurons, and in certain epithelial nervous system neurons, and in certain epithelial cells involved in Ca2+ transport such as distal tubular cells and cortical collecting tubules of the kidney, and in enteric neuroendocrine cells.

别名

CAB27; CALB 1; CALB; CALB1; Calbindin 1 28kDa; Calbindin-D-28K; Calbindin D28; D 28K; D28K; Vitamin D dependent calcium binding protein; Vitamin D dependent calcium binding protein avian type; Vitamin D dependent calcium binding protein avian-type; Vitamin D-dependent calcium-binding protein; CALB1_HUMAN.

验证数据

（大鼠钙结合蛋白 D28K IHC 试剂盒） 对石蜡包埋的大鼠肾组织切片进行免疫组化分析。

石蜡包埋组织的免疫组织化学方案

1. 脱蜡水化

石蜡切片置于新鲜二甲苯中浸泡脱蜡 3 次，每次 15 min；依次置于不同浓度（100%、95%、90%、80%、70%）乙醇浸泡各 5 min，再置于蒸馏水洗涤 5 min，重复 3 次。

2. 抗原修复

沸水浴修复：将 100×抗原修复缓冲液（试剂 2）用蒸馏水稀释成 1×抗原修复缓冲液，放入修复盒中并提前加热至95-100℃（注意盖好以防液体蒸发），然后将切片放入修复盒中，在沸水浴环境中保持外沸状态 15 min，室温自然冷却；用 PBS 缓冲液（试剂 1，将干粉溶解在 2L 蒸馏水中）清洗 5 min，重复 3 次。

3. 阻断内源性过氧化物酶

用吸水纸吸去玻片上多余的液体，用免疫组化笔在组织周围画圈，加入 2-4 滴内源性过氧化物酶阻断剂（试剂 3），室温下置于湿盒中孵育 15 min，用 PBS 洗涤 5 min，重复 3 次。

4. 血清封闭

用吸水纸吸去玻片上多余的液体，加入 2-4 滴封闭工作液（试剂 4），置于湿盒内 37℃封闭 20 min，以减少非特异性染色。

5. 一抗孵育

用吸水纸吸去玻片上多余的液体，加入 2-4 滴 Histone H3 鼠单抗工作液（试剂 5），置于湿盒中，4℃孵育过夜或37℃孵育 1-2 h。

6. 复温

4℃孵育过夜后，室温下复温 15 min（若在室温下孵育一抗，则直接进入下一步清洗）；用 PBS 洗涤 5 min，重复3 次。

7. 二抗孵育

用吸水纸吸玻片上多余的液体，加入 2-4 滴 HRP 标记羊抗鼠 IgG 工作液（试剂 6），置于湿盒中，37℃孵育 1-2 h；用 PBS 洗涤 5 min，重复 3 次。

8. 显色

用吸水纸吸去玻片上多余的液体，在每张切片上滴加约 50 μL 新配制的 DAB 工作液（试剂 7:试剂 8:PBS=1:1:18），作用 3-5 min。显微镜下观察结果，达到合适的显色强度后，用蒸馏水冲洗切片以终止反应，用蒸馏水冲洗 5 min，重复 3 次。

9. 复染

滴加适量复染试剂（试剂 9）复染 3-5 min，蒸馏水冲洗 5 min，滴加盐酸酒精分化约 30 s，蒸馏水洗涤 5 min，重复 2 次。

10. 脱水封片

将玻片依次置于不同浓度（70%、80%、90%、95%、100%）乙醇，各 5 min；然后置于新鲜二甲苯中浸泡脱蜡3 次，每次 15 min。用吸水纸吸去多余的二甲苯，滴加适量封片剂（试剂 10）在组织上，将盖玻片盖在组织上，避免产生气泡。

注意事项

1. 建议检测时进行阴性及阳性对照，以提高实验的可靠性。

2. 本品中的配套试剂，请不要用其他生产商产品替换使用。

3. DAB 为致癌物质，请采取必要的防范措施。

4. PBS 洗涤液（试剂 1）配制后在 4℃可保存一周；抗原修复液（试剂 2）及显色剂（试剂 7 和 8）的工作液需每次实验时现用现配。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！