miRNA cDNA第一链合成试剂盒

miRNA cDNA第一链合成试剂盒

产品及特点 本试剂盒采用在 miRNA 3’末端加多聚 A 尾的方法来使 miRNA 具有 Poly(A)尾，之后再使用 Oligo(dT)-Tag 引物进行逆转录反应，最终合成 miRNA 对应的第一链 cDNA。其反应流程如下：

本产品具有如下特点：
1. 两步式操作，先进行 Poly(A)加尾，再进行逆转录反应。
2. 只需要 1 ug 的 total RNA。
3. 所得 cDNA 可用于检测多种 miRNA，不仅减少了误差、节约了样品，同时还实现了检测的高通量。
4. 与 miRNA 荧光定量 PCR 检测试剂盒兼容。

5. 特异性好，独特的 miRNA 引物及反应体系避免了 Pre-miRNA 的非特异扩增。

规格及成分

运输及保存 低温运输，-20℃保存

使用方法 一、对 miRNA 3' 末端进行加 Poly (A)处理

1. 在冰上预冷 RNase-Free 的反应管内加入以下试剂至总体积 20 uL。注意需要 最后加入 E.coli Poly(A)聚合酶。

注：在反应中使用的 Total RNA 必须含有 miRNA。也可以直接使用 miRNA （建议加入量为 2–5uL，需根据目的 miRNA 的丰度决定）。    

2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在 37℃反应 60 min。所得的 反应液可以直接进行下游实验（注意：只能把 2uL 直接用于后续的 RT 反应， 多于 2uL 则需要先乙醇-乙酸钠沉淀，再将加尾后的 miRNA 溶于水，然后再 取所需量用于 RT。如果不经过沉淀，带入的残留的 poly（A）聚合酶反应液将 会干扰 RT 反应），也可以放置-20℃短暂保存。如需长期保存建议存放于-80℃。

二、对带 Poly (A)尾巴的 miRNA 进行逆转录反应

3. 按照下表设置 20 uL 体系的 RT 反应：

4. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在 42℃反应 60 min。

5. 70℃保温 10 min 终止反应。

6. 合成的 cDNA 反应液可放置于-20℃保存；也可以暂时冰上放置，立即用于后 续的荧光 PCR 定量检测，不需要纯化。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！