Bradford法蛋白定量试剂盒

Bradford法蛋白定量试剂盒

产品及特点 Bradford 法测定蛋白质浓度是最为常用的蛋白检测方法之一，在酸性条件下， 考马斯亮蓝（Coomassie G-250）染料能与蛋白质结合形成复合物，其最大吸光 值也由 465 nm 转移到 595 nm，通过颜色的强弱即可测定蛋白质浓度的高低。本 产品是基于 Bradford 法蛋白检测原理开发的产品，具备下述特点： 

1. 快速，10-20 个样品只需要 10 分钟即可完成测定。

2. 稳定，加样混匀后 2 分钟既可测定，1 小时内吸光度变化不超过 10%。

3. 线性范围在 50～1000 µg/mL。

4. 最小测量体积为 1-20 uL，最低测量蛋白量为 0.5 ug。

5. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。

6. 有常规和微量两种检测模式

7. 不受绝大部分样品中的化学物质的影响。巯基乙醇的浓度可高达 1M，二硫苏 糖醇的浓度可高达 5mM。

8. 受略高浓度的表面活性剂影响，各种蛋白质与染料的结合效率可能有差异。

9. 本产品至少可以按常规法测 200 次，按微量法测 1000 次。

规格及成分

运输及保存 常温运输和保存，BSA 标准需低温运输、-20℃保存，有效期一年。

自备仪器试剂 超纯水、分光光度计

使用方法 一：制备溶液 A 工作液

1、 将试剂盒提供的Bradford 法蛋白定量溶液 A 与自备超纯水按 1：4 比例充分混 合即为溶液 A 工作液 (例：4 mL 溶液 A + 16 mL 超纯水= 20 mL 溶液 A 工 作液)。每次配制多少取决于检测方法和测试体积，需要预先按下面手册计算。

2、 用本试剂盒提供的滤纸过滤溶液 A 工作液。过滤后的工作液室温条件下可稳定 使用 1-2 星期。注意：不同型号、规格的滤纸，具有不同的孔径，导致可通过 的分子各不相同。请使用本公司指定提供的滤纸，否则会导致不同的测定结果。

二、制备 BSA 标准品梯度稀释液

3、 测试开始之前，应首先制备 BSA 标准品梯度稀释液。本试剂盒使用 BSA 作为 标准品。用户也可以使用自备的其他蛋白质浓度测定用标准品。每个浓度具体 需要多少体积取决于检测方法和测试体积，需要预先按下面的手册计算。没有 用完的 BSA 标准品梯度稀释液可以放-20℃待下次使用。

a) 如果进行常规检测，建议用溶解待测样品的缓冲液将 BSA（2 mg/mL） 稀释成下面的 8 个浓度： 

0µg/mL、31.25µg/mL、62.5µg/mL、125µg/mL、250µg/mL、 500µg/mL、750µg/mL、1000µg/mL 

b) 如果进行微量检测，建议用溶解待测样品的缓冲液将 BSA（2 mg/mL） 稀释成下面的 6 个浓度： 

0µg/mL、2.5µg/mL、5µg/mL、7.5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL。

三、常规检测流程

‍常规检测法在蛋白浓度 30 - 1000 µg/mL 范围内呈现 R² = 0.996 的直线线 性回归，可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。‍

4、 在标记的离心管中分别加入 N 个待测蛋白样品和 8 个 BSA 梯度稀释液，然后 再在每个离心管中按 1:50 的比例加入溶液 A 工作液。终体积多少取决于比色 杯的体积。 

如果用 3 mL 比色杯检测，则取 100 µL 样品+5 mL 溶液 A 工作液； 

如果用 1 mL 比色杯检测，则取 40 µL 样品+2mL 溶液 A 工作液； 

如果用平底透明 96 孔板，则取 20 µL 样品+1 mL 溶液 A 工作液。

5、 样品与溶液 A 工作液混合后，充分震荡 30 秒混匀。

6、 室温放置 5 分钟。

7、 分光光度计检测吸光度。波长设定= 595nm。用 96 孔板测定时，应确保没有 气泡，否则气泡会绝对增加吸光度的读数。

8、 将待测样品的测定值逐一跟用 BSA 梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得 到待测样品的蛋白质浓度。

四、微量检测流程

‍此方法在蛋白浓度 1～20 µg/mL 范围内呈现 R² = 0.992 的直线线性回归， 可精确定量蛋白浓度在此范围内的蛋白样品。‍

9.在标记的离心管中分别加入 N 个待测蛋白样品和 6 个 BSA 梯度稀释液，然后再在每个离心管中按 4:1 的比例（注意：不是 1:50）加入溶液 A 工作液。终 体积多少取决于比色杯的体积。 

如果用 3 mL 比色杯检测，则取 4 mL 样品+1 mL 溶液 A 工作液； 

如果用 1 mL 比色杯检测，则取 2 mL 样品+0.5 mL 溶液 A 工作液； 

如果用平底透明 96 孔板，则取 400 µL 样品+100 µL 溶液 A 工作液。

10.样品与溶液 A 工作液混合后，充分震荡 30 秒混匀。

11. 室温放置 5 分钟。 

12. 分光光度计检测吸光度。波长设定= 595nm。用 96 孔板测定时，应确保没有 气泡，否则气泡会绝对增加吸光度的读数。 

13. 将待测样品的测定值逐一跟用 BSA 梯度稀释液测定值绘制的标准曲线比较得 到待测样品的蛋白质浓度。

注意事项

1、 BCA 法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应 会因温度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在 60℃孵育 30 分钟或更长。

2、 待测样品浓度在 20～2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。

3、 在一定浓度范围内 BCA 法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响：

4、 本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响，所以需确保 EDTA 浓度不高于 10mM，二硫苏糖醇不高于 1mM，β-巯基乙醇不高于 1mM，没有任何 EGTA，否则建议使用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！