Klenow片段（3′→5′exo-），5U/uL

Klenow片段（3′→5′exo-），5U/uL

产品及特点 Klenow 片段是大肠杆菌 DNA 聚合酶 I 的蛋白水解产物。它保留了 DNA聚合酶活性，具有 3’→ 5’外切酶活性，但不具有 5´→3´ 外切核酸酶活性。可以在 DNA 模板和引物存在的条件下，选择性地催化底物 dNTP 沿 5’→ 3’方向合成与模板互补的 DNA。本产品是重组表达得到，它具体有下列用途：
1. 双链 DNA5’突出末端的平滑化。
2. 用随机引物制备探针。
3. 随机引物标记法。
4. 寡核苷酸定向诱变（Oligonucleotide directed mutagenesis）中双链 DNA的合成。

5. 双脱氧法 DNA 序列测定（Sanger 法）。

规格及成分

活性定义： 以合成的 Poly d(A-T) DNA 为模板/引物，在 37℃、pH7.4 的条件下， 30 分钟内使 10 nmol 的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为 1 个 活性单位(unit)。 活性定义反应液：67mM 磷酸钾、pH7.4、6.7 mM MgCl2、0.1mM DTT、20uM DNA 模板、33 uM dATP，33uM【3H】dTTP 纯度： 1. 10 units 的本产品和 1 μg 的超螺旋 pBR322 DNA(Form I)在 37℃下反应 1 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。 2. SDS-PAGE：＞95%。 酶储存 buffer：50 mM 磷酸钾，pH 6.5，1 mM DTT，50%甘油 10×Klenow Fragment Buffer： 100 mM Tris-HCl，pH7.5、70 mM MgCl2、 1 mM DTT。注意：本 buffer 可用于标记或末端平化等常规实验，与活性定义所用 的 buffer 组成不同。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 模板 DNA；引物

使用举例：随机引物的同位素标记反应

1. 在微量离心管中配制下列反应液

2. 95℃保温 3 分钟。然后冰中急冷 5 分钟。

3. 加入 2.5 μl 10×Klenow Fragment Buffer。

4. 加入 2.5 μl dNTP (0.2 mM dATP,dGTP,dTTP)。

5. 加入 5 μl 111 TBq/mmol [α32P].dCTP (3000 Ci/mmol)(1.85 MBq, 50 μCi)

6. 加入 1 μl 本产品，反应液共 25 μl。

7. 37℃反应 3 小时。 65℃加热 5 分钟。反应液可直接作为探针使用。如有必要，可以通过用柱式探针纯化试剂盒除去未反应的标记的 dCTP。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！