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产品及特点
本产品是基于 Feinberg 和 Vogelstein 发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA 探针标记试剂盒，标记过程由双链 DNA 热变性、随机引物与单链 DNA 结合、在Klenow DNA 聚合酶催化下，引物的延伸合成 DNA 探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：
本产品对 Feinberg 和 Vogelstein 经典方法进行了改良，具有下列特点：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的 Klenow exo- DNA 聚合酶，已标记 DNA 探针不会被酶降解。
3. 快速，最快 1 小时即可完成标记反应。
4. 得到的 DNA 探针比活性高（如果是同位素，可以达到 109cpm/ug DNA）。
5. 所需模版 DNA 量少，可以是各种形状（线状和环状）的、也可以是单链或双链的，但长度必须在 100 bp 以上。
6. 得到的探针长度在 200-400 nt 之间，可以用于 Southern 杂交、Northern 杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
规格及成分
A 型
B 型（生物素标记）
C 型（DIG 标记）
运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 0.5M EDTA（pH8.0）。如果是 A 型，则需要自备标记的核苷酸。
使用方法
1. 在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：
注意：非同位素标记基团疏水性强，易与塑料离心管表面非特异性结合，所以要硅化塑料离心管。模板 DNA 并非越多越好，否则会竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴 5-10 分钟，或在 PCR 仪上 100℃加热 5-10 分钟后立即放冰上待用。
3. 高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：
注：上表中的 dTTP/标记 dUTP 混合物中 dTTP 和标记的 dUTP 的总浓度为 2mM，dTTP 与标记 dUTP 的比例在 65：35 为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如 fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin 和 aminoallyl 标记的 dUTP，则用户需要自己摸索其与 dTTP 之间的最佳比例，如果使用 32P 标记的 dUTP，则比活最好为 3000Ci/mmol，浓度为好为 10uCi/uL，并且不需要加入 dTTP。4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。5. 37℃保温 1-20 小时。标记效率跟模板量和保温时间相关，具体见下表：
6. 加 1 uL 自备的 0.5M EDTA（pH 8.0）终止反应，加热 100℃ 5 分钟使 DNA 探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素标记的 DNA 探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的 DNA 进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和 Sephadex G50回收。对比活高的同位素标记探针，由于同位素其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
