microRNA茎环法逆转录试剂盒

‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍microRNA茎环法逆转录试剂盒‍

‍产品及特点‍ 本产品通过利用茎环引物有效地延长 microRNA 的逆转录产物长度，使用 茎环引物获得的逆转录产物可直接用于后续的染料法或探针法荧光定量检测， 茎环引物具有序列特异性，针对不同的 miroRNA，具有不同的茎环引物序列以 及正向 qPCR 引物序列。

本产品是根据茎环法 microRNA 转录的原理开发的，具有下列特点：

1. 使用突变的反转录酶，内源 RNase H 活性低。

2. 最长可合成 13 Kb 的 cDNA。

3. 总 RNA、microRNA 均可作为模板。

4. 可用于 cDNA 文库构建、RT-PCR、探针标记等。

‍规格及成分

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂 RNA 模板、特异性的茎环引物。

使用方法

1. stem-loop RT 引物设计：基于通用的茎环结构，只需要只需在通用茎环 序列后加上 miRNA3’末端的即可。通用茎环结构序列为： GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGAC

2. Realtime 上游引物设计：miRNA 序列除去 3’端 6 个碱基的剩余部分作 为上游引物，检查引物的 Tm 值，如果 Tm 值较低，则在 5’端加 GC 使 Tm 值接近 60 度。下游引物是通用的，序列为 GTGCAGGGTCCGAGGT 或者 ATCCAGTGCAGGGTCCGAGG。

3. 在标记管中按下表加入各成分

4. 轻轻混匀后离心 3~5s，反应混合物 16℃温浴 30min，然 37℃温浴 30min，85℃加热 5min 使酶失活，4℃保存。

5. 获得的 cDNA 反应液可直接作为模板进行荧光定量检测。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！