羟自由基清除能力检测试剂盒 微量法

羟自由基清除能力检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂四：试剂放于试剂瓶内 EP 管中。临用前加入 9.84 mL 蒸馏水混匀，也可按比例现用现配，配好的试剂 2-8℃保存 4 周。

产品说明：

羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。羟自由基清除能力是样本抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织样本的制备：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清、果汁等液体样本可直接测定。若溶液有浑浊则离心后去上清进行测定。

3、提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如 5mg/mL。

二、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至536nm，分光光度计蒸馏水调零。

2. 操作表：在1.5或0.5mLEP管中分别加入下列试剂

三、计算公式

羟自由基清除率 D%=（A测-A对）÷（A空-A对）×100%

注意事项:

1. 为了比较不同样本羟自由基清除能力，对于同一批样本必须加入等量的样本，血清、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。

2. 样本过多时，可以按体积比试剂一：试剂二：试剂三=0.05：0.1：0.1的比例配制工作液，现用现配。

实验实例：

1、 取 0.1g 脾脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算：羟自由基清除率 D%=（A 测-A 对）÷（A 空-A 对）×100%=(0.77-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=82.78%。

2、 取 0.1g 稗草叶加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算：羟自由基清除率 D%=（A 测-A 对）÷（A 空-A 对）×100%=(0.698-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=71.9%。

3、 取兔血清后按照测定步骤操作，用 96 孔板测得计算：羟自由基清除率 D%=（A 测-A 对）÷（A 空-A 对）×100%=(0.553-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=50%。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！