UDPG 焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
规格: 50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
![image 2022060709013546686](https://www.shlmai.net/upload/ueditor/image/20220607/2022060709013546686.png)
溶液的配制:
1. 试剂一:临用前加 15 mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融,-20℃保存 2 周。
2. 试剂二:临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后 4℃保存,禁止反复冻融,4℃保存 1 周。
3. 试剂三:临用前加 1.4 mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融,-20℃保存 2 周。
4. 试剂四:临用前每支加 1 mL 蒸馏水充分溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融,-20℃保存 2周。
5. 工作液的配制:将试剂一:试剂二:试剂三:试剂四:试剂五:试剂六按体积比=600:100:20:40:100:250混合,现用现配。
产品说明:
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase,UGP,EC 2.7.7.9)在自然界广泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖(UDPG),UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式,作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。
UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖,其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH,UGP活性可以用340nm的吸光值的变化来反应。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
血清等液体:直接检测。
二、测定步骤
1、 紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、 操作表:
![image 2022060709023269714](https://www.shlmai.net/upload/ueditor/image/20220607/2022060709023269714.png)
三、UGP 酶活计算
![image 2022060709025448188](https://www.shlmai.net/upload/ueditor/image/20220607/2022060709025448188.png)
注意事项:
1. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔,正常情况下,变化不超过0.01。
2. ΔA大于0.6或者A2测定大于1.2时,建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时,可以延长反应时间(5min或10min)来测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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