总糖含量检测试剂盒 可见分光光度法

总糖含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

产品说明：

糖类物质是构成植物体的重要成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖，麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。总糖酸水解为还原糖，还原糖在碱性条件下与DNS试剂共热后被还原成氨基化合物，在碱性溶液中呈红棕色，还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系，以此测定样本中的总糖含量。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织样本的处理：称取约 0.1g 样本于 10mLEP 管中，加入 1mL 试剂一，1.5mL 蒸馏水，研磨匀浆，沸水浴 30min，加入 1mL 试剂二，涡旋混匀，用蒸馏水定容至 10mL，8000g，25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）。

2、血清（浆）、液体样本的处理：取 0.1mL 血清（浆）于 1mLEP 管中，加入 0.1mL 试剂一，0.15mL 蒸馏水，匀浆，沸水浴 30min，加入 0.1mL 试剂二，涡旋混匀，用蒸馏水定容至 1mL，8000g，25℃离心 10min，取上清液待测。（注意稀释，见注意事项）。

二、测定步骤

1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

三、总糖含量计算

1、标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。

2、按样本质量计算：总糖（mg/g 质量）=（x×V 样总）÷W×稀释倍数=10×x÷W×稀释倍数

3、按血清（浆）、液体体积计算：总糖（mg/mL）=（x×V 提）÷V 样×稀释倍数=10×x×稀释倍数

V 样总：样本体积总体积，10mL；W：样本质量，g；V 提：液体或血清样本总体积，1mL；V 样：液体或血清体积，0.1mL。

注意事项：

1、此试剂盒对于纤维素的分解程度无法达到 100%。

2、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。

实验实例：

1、 取 0.1g 兔子肝脏进行样本处理，取上清，按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.965-0.019=0.946，标准曲线 y=1.2984x-0.0284，则 x=0.7505，按样本质量计算含量得：

总糖（mg/g 质量）=10×x÷W=75.05 mg/g 质量。

2、 取 0.1g 迎春进行样本处理，取上清，按照测定步骤操作，测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.961-0.019=0.942，标准曲线 y=1.2984x-0.0284，则 x=0.7474，按样本质量计算含量得：

总糖（mg/g 质量）=10×x÷W=74.74 mg/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！