酸性木聚糖酶活性检测试剂盒 可见分光光度法

酸性木聚糖酶（ACX）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、试剂一：临用前加入 12mL 蒸馏水使用，2-8℃保存 3 个月。

2、标准品：10mg 木糖。临用前加入 667μL 缓冲液配成 100μmol/mL 的标准品溶液，2-8℃保存 8 周。

产品说明：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，酸性木聚糖（ACX）一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。

ACX 在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm吸光值增加速率，可计算 ACX 活力

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液枪、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 发酵液：发酵液于 8000rpm，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样本。

2. 酶干粉：称约 1mg，加 1mL 缓冲液溶解，蒸馏水稀释 10 倍待测。

3. 组织样本：称约 0.1g 组织，加入 1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心 15min，取上清蒸馏水稀释 10 倍待测。

二、测定步骤

1、 可见分光光度预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、 标准品稀释：取20μL 100μmol/mL木糖标准液，加入980μL缓冲液，充分混匀，配制成2μmol/mL的木糖标准液备用，现用现配。（实验中每管需要200μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、 样本测定：（在EP管中加入下列试剂）

三、ACX活性计算

1、发酵液 ACX 活力计算：

酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力（U/mL）= C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷T

= 0.067×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）

C 标准：木糖标准溶液浓度，2μmol/mL；T：反应时间，30min。

2、酶干粉 ACX 活力计算：

酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力（U/mg）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 提取÷W1÷T

= 0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W1

10：样本稀释倍数，10 倍；C 标准：木糖标准溶液浓度，2μmol/mL；V 提取：加入缓冲液体积，1mL；W1：酶干粉重量，mg；T：反应时间，30min。

3、组织中 ACX 活力计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

酶活定义：50℃，pH 4.8 条件下，每 mg 组织蛋白每分钟分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力（U/mg prot）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 样本÷(V 样本×Cpr)÷T

= 0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷Cpr

（2）按样本质量计算：

酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每克组织每分钟分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚

糖酶的活力单位。

ACX 活力（U/g 质量）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 提取÷W2÷T

 = 0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W2

10：样本稀释倍数，10 倍；C 标准：木糖标准溶液浓度，2μmol/mL；V 提取：加入缓冲液体积，1mL；W2：样本质量，g；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V 样本：加入的样本量，0.2mL。

注意事项：

吸光度变化应该控制在 0.01~1.2 之间，否则加大样本量或稀释样本，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

实验实例：

1. 取 0.1g 草莓加入 1mL 缓冲液进行匀浆研磨，取上清用缓冲液稀释二十倍后按照测定步骤操作，测得 A 测定

=0.927、A 对照=0.875、A 标准=0.852、A 空白=0.160，按样本质量计算酶活得：

ACX 活力（U/g 质量）=0.067×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W2=1.0069 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！