葡萄糖含量检测试剂盒可见分光光度法 可见分光光度法

葡萄糖含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

产品说明： 葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用 产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源，而且与还原性辅酶、 乳糖和乳脂的合成密切相关。 

葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase，GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶（Peroxidase， POD）催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织的处理：按照组织质量（g）：蒸馏水体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL蒸馏水），研磨成匀浆，置沸水浴中煮沸 10 min（盖紧，防止水分散失），冷却至室温后，8000g，25℃离心 10min，取上清液备用。

2. 细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 蒸馏水），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3 s，间隔10 s，重复30次），置沸水浴中煮沸10min（盖紧，防止水分散失），冷却至室温后，8000g，25℃离心10min，取上清液备用。

涡旋混匀，置于 37℃（哺乳动物）水浴锅/恒温培养箱或 25℃（其它物种）水浴锅中保温 15min 后，于 505nm波长处读取吸光度 A，分别记为 A 空白、A 标准和 A 测定。计算 ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白。（空白管和标准管只需测 1-2 次）。

三、葡萄糖含量计算

1、按蛋白浓度计算

葡萄糖含量（μmol/mg prot）= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷（Cpr×V 样）=ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr

2、按样本质量计算

葡萄糖含量（μmol/g 质量）= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷（W÷V 样总×V 样）= ΔA 测定÷ΔA 标准 ÷W

3、按细菌或细胞数量计算

葡萄糖含量（μmol/10⁴ cell）= C ×ΔA 测定÷ΔA 标准×V 样÷（500÷V 样总×V 样）= 0.002×ΔA 测定÷ΔA 标准

C：葡萄糖溶液浓度，1μmol/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V 样：加入的样本体积，100μL=0.1mL；V

样总：样本总体积，1mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞数量，500 万。

注意事项：

如果样本吸光值大于1.3，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。计算公式中注意乘以稀释倍数。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！