脂蛋白酯酶（LPL）检测试剂盒 可见分光光度法

脂蛋白酯酶（LPL）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

产品说明：

脂蛋白酯酶（Lipoproteinlipase，LPL）是甘油三酯降解的降速酶，可催化甘油三酯水解为脂肪酸和单酸甘油酯，主要在肝脏实质细胞中合成，在脂质代谢和转运中发挥重要作用。脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚，在400nm有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰、丙酮和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。

2、 将5μmol/mL标准液用试剂一稀释16倍至0.3125μmol/mL的标准溶液备用。

3、 操作表：在1.5mL EP管中进行下列操作：

三、LPL活性计算

1、血清（浆）LPL活力计算

单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫升血清每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL（U/mL）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准

2、组织、细菌或细胞中LPL活力计算

（1）按样本质量计算

单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL（U/g 质量）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL（U/mg prot）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷（V提取×Cpr）÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA标准÷Cpr

（3）按细菌或细胞数量计算：

单位定义：在45℃，pH7.5条件下，每10⁴个细胞每分钟水解产生1nmol 4-硝基苯酚为一个酶活力单位。

LPL（U/10⁴ cell）=ΔA÷（ΔA标准÷C标准）×V提取÷500÷T×1000=0.0625×ΔA÷ΔA标准

C标准：标准溶液浓度，0.3125μmol/mL；V提取：加入试剂一体积，1mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；1000：单位换算系数，1μmol=1000nmol。

注意事项：

1、 测定管加入试剂二后混变浑浊为正常现象。

2、 若A大于1，将粗酶液用试剂一稀释后再进行测定。

实验实例：

1、 取0.1g大鼠肌肉加入1mL试剂一，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A测定管- A对照管=0.697-0.160=0.537，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.545-0.001=0.544，按样本质量计算酶活得：

LPL（U/g 质量）= 31.25×ΔA÷ΔA标准÷W=31.25×0.537÷0.544÷0.1=308.48 U/g 质量。

2、 取兔血清稀释2倍后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A测定管- A对照管=0.639-0.096=0.543，ΔA标准=A标准管-A空白管=0.545-0.001=0.544，按血清（浆）体积计算酶活得：

LPL（U/mL）= 31.25×ΔA÷ΔA标准×2（稀释倍数）=31.25×0.543÷0.544×2（稀释倍数）=62.39 U/mL。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！