乙酰胆碱酯酶(AchE)活性检测试剂盒 可见分光光度法

乙酰胆碱酯酶（AchE）活性检测试剂盒

可见分光光度法

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1．试剂二：临用前加入 5.2 mL 试剂一，充分震荡溶解；

2．试剂三：临用前加入 5.2 mL 试剂一，充分震荡溶解；

3．试剂四：临用前加入 5 mL 蒸馏水充分溶解，备用。

产品说明：

AchE 属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE 催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。

AchE 催化 Ach 水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在 412nm 处有吸收峰，通过测定 412nm 吸光度增加速率，计算 AchE 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清液待测。

2. 细菌、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定：

三、AchE 酶活计算公式

1. 组织 AchE 活性

（1） 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(U/mg prot)=[ΔA÷ε÷d×V 显色×10⁹] ÷（Cpr ×V 样×V 上清÷V 酶促）÷T=2255×ΔA ÷Cpr

（2） 按照样本质量计算

活性单位定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(U/g 质量)=[ΔA÷ε÷d×V 显色×10⁹]÷（W ×V 样÷V 样总×V 上清÷V 酶促）÷T =2255×ΔA÷W

2. 细菌、细胞 AchE 活性

活性单位定义：每 10⁴ 个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(U/10⁴ cell)=[ΔA÷ε÷d×V 显色×10⁹]÷（细胞数量×V 样÷V 样总×V 上清÷V 酶促）÷T

=2255×ΔA÷细胞数量

3. 血清 AchE 活性

活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 为 1 个酶活单位。

AchE 酶活(U/mL)=[ΔA÷ε÷d×V 显色×109]÷（V 样×V 上清÷V 酶促）÷T =2255×ΔA

ε：TNB 摩尔消光系数，13.6×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 显色：显色反应体系总体积，1mL=0.001L；10⁹：单位换算系数，1mol=1×109nmol；V 酶促：酶促反应总体积，0.23mL；V 上清：吸取上清液体积，0.05mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V 样：加入样本体积，0.03mL；T：反应时间，5min；细胞数量：提取时的细胞数量，万个。

注意事项：

1.测定过程中样本和工作液在冰上放置，以免变性和失活。

2.当吸光值大于 1 时，建议将样本稀释后测定。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！