谷丙转氨酶(GPT/ALT)活性检测试剂盒 可见分光光度法

谷丙转氨酶（GPT/ALT）活性检测试剂盒说明书

可见分光光度法

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂一：同时提供两个 8 mL 棕瓶；临用前取一支试剂一倒入一个空瓶中，用 4 mL 蒸馏水溶解，再用溶液将试剂一残留试剂润洗下来；

2、 标准液：20 μmol/mL 丙酮酸钠溶液。

产品说明：

谷丙转氨酶又叫丙氨酸氨基转移酶（EC 2.6.1.2），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细胞或细菌样本的制备：先收集细胞或微生物样本到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

2、标准曲线的稀释：首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL，按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管：

3、在 EP 管中加入下列试剂

注：0μmol/mL 标准管为空白管。

三、GPT 活性计算

1. 标准曲线的绘制：

以各标准溶液浓度为x轴，以?A（A标准管-A空白管）为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b。将（A测定管-A对照管）带入方程求x值（μmol/mL）。

2. GPT活性计算：

（1）按样本质量计算：

单位定义：每小时每g样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT（U/g 质量）=x×（V样本+V试剂一）÷（W×V样本÷V样总）÷T=12x÷W

（2）按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT（U/mg prot）=x×（V样本+V试剂一）÷（Cpr×V样本）÷T=12x÷Cpr

（3）按血清体积计算：

单位定义：每小时每mL血清样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT（U/mL）=x×（V样本+V试剂一）÷V样本÷T=12x

（4）按细胞或细菌数量计算：

单位定义：每小时每10⁴个细胞或细菌催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT（U/104 cell）=x×（V样本+V试剂一）÷（500×V样本÷V样总）÷T=0.024x

V样本：样本体积，0.02mL；V试剂一：试剂一体积，0.1mL；V样总：提取液体积，1mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；T：反应时间，0.5h；500：细胞或细菌总数，500万。

实验实例：

1、 取 0.1g 兔子肝脏组织加入 1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后再按照测定步骤操作，测得 A 测定管=1.181，A 对照管=0.458，计算?A =A 测定管-A 对照管=1.181-0.458=0.723，带入标准曲线 y=0.5286x+0.0362，计算 x=（0.723-0.0362）÷0.5286=1.299，按样本质量计算酶活得：

GPT（U/g 质量）=12x÷W=12×1.299÷0.1=155.88 U/g 质量。

2、 取兔血清直接检测，测得 A 测定管=0.514，A 对照管=0.383，计算?A=A 测定管-A 对照管=0.514-0.383=0.131，带入标准曲线 y=0.5286x+0.0362，x=（0.131-0.0362）÷0.5286=0.179，按血清（浆）体积计算酶活得：

GPT（U/mL）=12x=12×0.179=2.148 U/mL。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！