维生素E含量检测试剂盒高效液相色谱法

维生素 E 含量检测试剂盒说明书

 高效液相色谱法 

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 

规格: 50T/48S 

产品简介：维生素 E（VE）是一种人体必需的脂溶性维生素，易溶于脂肪和乙醇等有机溶剂中。维生素 E 具有保护机体组织结构完整，维持机体正常繁殖机能，增强机体免疫力等作用。 维生素 E 在一定的光激发条件下具有荧光特性，可利用荧光检测器测定其含量。

试验中所需的仪器和试剂： 

高效液相色谱仪（ZORBAX Extend C18 色谱柱（4.6×250 mm），荧光检测器（FLD））、台式 离心机、可调式移液枪、研钵/匀浆器、混匀仪、EP 管、针头式过滤器（有机系）、注射器、抽滤 器、滤膜（水系、有机系）、棕色进样瓶、超纯水、甲醇（色谱纯）。

产品内容： 

提取液：液体 60 mL ×1 瓶，4℃保存。 标准品：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加入 1 mL 甲醇配制成 5 mg/mL 维生素 E 标准溶 液，-20℃密封保存，避免阳光直射。

实验前准备工作： 

1. 将甲醇（色谱纯）用有机系滤膜抽滤。

2. 将抽滤好的流动相超声 20 min，除去气泡。

3. 标准品的配制：将 5 mg/mL 的维生素 E 标准溶液采用倍比稀释的方法分别用甲醇稀释成

100μg/mL、20 μg/mL、4 μg/mL、0.8 μg/mL、0.16 μg/mL 的维生素 E 标准溶液。-20℃避光保存（密封），测试前采用有机系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内，待测。

操作步骤：

一、维生素 E 的提取：

按组织质量（g）: 提取液体积（mL）1:5~10 比例进行提取，建议称取约 0.2 g 样本，加入 1 mL提取液，冰浴匀浆，密封室温条件下避光漩涡剧烈震荡 30 min，10000 rpm 离心 10 min，取清液，测试前采用有机系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内，待测。

二、测定步骤：

1. 开启电脑、打开高效液相色谱仪各模块开关按钮，安装上色谱柱，打开软件，在方法组中设置进样量为 10 μL，柱温：30℃，流速为 1 mL/min，荧光检测器：Ex=295 nm，Em=330 nm。单个样本走样时间 16 min，设置完毕保存方法组。

3. 采用相应的流动相清洗柱子，用流动相平衡柱子，待基线稳定后开始加样。

4. 检测待测的标准品溶液，进样量为 10 μL，在 16 min 内可分离出维生素 E，维生素 E 的保留时间约为 12 min（体系、柱子、流动相 pH、温度等不同，保留时间有差异，仅作为参考）。

5. 检测待测的样品溶液，进样量为 10 μL，在相应的保留时间处检测维生素 E 的峰面积。

注意：单个样本测定完成后注意样本物质是否还有残留，必要时可相应延长后运行时间进行色柱的清洗。

三、维生素 E 含量计算

以标准品浓度（μg/mL）为横坐标 x，峰面积为纵坐标 y 绘制维生素 E 的标准曲线 y=kx+b，将

样本的峰面积代入标准曲线，计算提取液中维生素 E 的浓度 x（μg/mL）。

维生素 E 的含量（μg/g）= x ×V 提取÷W×F=x÷W×F

V 提取：加入提取液体积，1 mL；W：样本质量，g；F：稀释倍数，稀释后测试的样本，计算

时需要乘以相应的稀释倍数。

注意事项

1. 测试完毕后，需要用高浓度的超纯水相清洗色谱柱（约 20-30 个柱体积），再用高浓度的有机相冲洗色谱柱，最 后按柱子的种类规范冲洗，防止损伤色谱柱。

2. 标准品的稀释倍数要根据样品中维生素 E 的浓度确定，样品中维生素 E 的浓度必须在标准品溶液的浓度范围之内，该标准品的稀释倍数只是一个参考。若样本中维生素 E 浓度过高，建议稀释后再测。

3. 若样本量过大，建议每天测试一次标准溶液（一个标准溶液即可），以确定相应的保留时间，待测溶液测试前须放置至室温状态。

4. 为了排除溶剂的影响，可进行一次空白检测。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！