细胞转染试剂盒（磷酸钙法）

产品概述

磷酸钙法细胞转染试剂盒(Calcium Phosphate Cell Transfection Kit)，在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效率，并降低了毒性。用磷酸钙法转染细胞，不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定株。 HEK293是最适合磷酸钙法转染的细胞之一，优化条件后转染效率可以高达85%以上；通常很容易达到40-50%左右的转染效率。大多数常见的细胞例如Hela细胞、CHO细胞等也都适合磷酸钙法转染，但效率比293细胞要略低一些。 本试剂盒不仅适合于大多数贴壁细胞的转染，也适用于一些悬浮细胞的转染。 本试剂盒提供的试剂都经无菌处理，可以直接使用。可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度

-20℃保存

注意事项

注意微生物污染

有效期

6个月

仪器准备

1. 离心机

2. 移液器

3. 冰箱

4. 冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液 2.HBSS

耗材准备

1. 离心管

2. 吸头

3. 一次性手套

使用注意事项

1. 注意无菌操作，尽量避免污染。

2. DNA不应含有蛋白和酚。

3. 休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高，但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。

4. 转染12～24h后，可以加入终浓度为10mmol/L的丁酸钠溶液，可以提高病毒滴度。

5. BBS Solution的pH值直接关系到转染效率，尽量避免长时间暴露在空气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。

6. 转染时，把DNA-氯化钙溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化钙溶液中。

7. 高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保A260/A280大于1.8，并且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。

8. 在用磷酸钙法转染细胞时应使用浓度不高于5%的二氧化碳，二氧化碳的最jia浓度为3%左右。

9. 转染时由于质粒不同、细胞不同，最jia的质粒用量需自行摸索。

使用方法

贴壁细胞转染：

1. 在转染前24h用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中，待细胞密度大70～80%满时即可进行转染。后续操作步骤均按6孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。

2. 在加入DNA之前2～4h，加入2ml不含抗生素的完全培养液，置于37℃ 5% CO2培养箱培养。

3. 取DNA(体积不宜超过20μl)加入100μl Calcium chloride solution，混匀，即为DNA-CaCl2溶液。

4. 取BBS solution 100μl，用移液器一边吹打BBS solution，一边逐滴加入DNA-CaCl2溶液(操作缓慢，一般在1～2min)。

5. 室温静置20～30min，即为DNA-CaCl2-BBS溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。

6. 取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物质均匀加入到6孔板细胞中，轻轻晃动混匀。

7. 置于37℃ 5% CO2培养箱培养。

8. 去除培养液，用PBS清洗细胞2次，加入2ml完全培养液继续培养，一般24h后可见转染细胞的表达。

悬浮细胞转染：

1. 低速离心收集悬浮细胞，用PBS洗涤1次。

2. 取DNA(体积不宜超过20μl)加Calcium chloride solution，混匀，即为DNA-CaCl2溶液。

3. 取BBS solution，用移液器一边吹打BBS solution，一边逐滴加入DNA-CaCl2溶液。

4. 室温静置，即为DNA-CaCl2-BBS溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。

5. 每106个细胞沉淀用100μl DNA-CaCl2-BBS溶液重新悬浮室温放置。

6. 6孔板每孔加入2ml不含抗生素的完全培养基，取DNA-CaCl2-BBS溶液底部物质均匀加入到6孔板中，轻轻晃动混匀。

7. 置于37℃ 5% CO2培养箱培养，去除培养液，用PBS清洗细胞2次，加入2ml完全培养液继续培养，一般24h后可见转染细胞的表达。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！