细胞内囊泡提取试剂盒-超纯

产品概述

细胞内囊泡（Vesicles）提取试剂盒（超纯）适用于从各种原代或传代培养细胞样品中提取高纯度总囊泡。不需要超速离心，仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的囊泡，具有快速简单，提取效率高的特点，可节省更多的实验时间和样本。提取的囊泡可根据实验目的用于后续的多种实验，应用范围广泛。 本试剂盒可以提取所有直径为10 nm - 3000 nm的囊泡结构。 生物自主开发的囊泡快速提取试剂盒系列产品，可以通过简单离心快速高效获得高纯度囊泡颗粒。本试剂盒提取的囊泡完好无缺，能用于各种功能研究、蛋白分析及RNA分析、电镜分析、NTA粒径分析等下游实验应用。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。

2.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

提取

适用样本

动物细胞

产品特点

1.使用方便，无需超速离心，省时省力；

2.纯度高，富集量大，应用范围广；

3.获取的囊泡结构和功能完整；

4.稳定性好，便于运输，便于保存。

产品应用

根据需要使用

仪器准备

1.离心机

2.移液器

3.冰箱

4.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.不同细胞的囊泡数量差异极大，请根据实际情况选择样品的量，根据下游应用和参考文献确定。条件允许的情况下采用尽可能多的细胞。

2.在收获细胞时，应确定死亡细胞不超过5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡，它们在囊泡的提取过程中会污染活细胞产生的囊泡。

3.已经分离好的囊泡样本如果需要进行电镜观察，只能冰上或4℃保存，存放时间不超过两天，注意不可冷冻保存，否则可能会影响电镜观察效果。

使用方法

囊泡提取：

1. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g力条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3. 细胞沉淀中加入1ml试剂D，充分混匀（每20μl体积细胞沉淀（约20mg，2×106个细胞）中加入200-300μl冷的提取液 D），高速涡旋振荡混匀或吹打混匀，置2-8℃条件振荡10-30分钟。

4. 然后在4℃，2000×g条件下离心5分钟。

5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。

6. 在1ml上清中加入0.25ml提取液A，盖紧离心管盖，上下颠倒混匀1分钟左右，使液体充分混匀。

7. 置2-8℃冰箱静置过夜。

8. 在4℃条件下，10000×g离心60分钟。

9. 小心移除上清，收集沉淀。

10. 取500μl囊泡保存液将沉淀重悬，用移液器轻轻吹打混匀，得到囊泡沉淀重悬液，进行下列囊泡纯化步骤操作。

清洗囊泡纯化离心管：

1. 用缓冲液或纯水进行预清洗。

2. 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。

囊泡纯化：

1. 将囊泡纯化离心管内管插入所提供的一个微量离心管中。

2. 向内管中加入过500 μl的囊泡沉淀重悬液样本，并盖上盖子。

3. 将盖好盖子的囊泡纯化离心管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。

4. 以5000-8000 ×g离心约10-15分钟。离心至大约剩余50μl-100μl液体。

5. 离心结束后将整个离心管从离心机中取出，取出内管。

6. 为了回收纯化后的囊泡，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。

7. 以1000 x g离心2分钟，使纯化后的囊泡样本从纯化内管转移到收集管中。

8. 吸取收集管中的液体，即得到囊泡样品纯品。

9. 用纯水或缓冲液洗涤内管和收集管，继续纯化下一个样品。

囊泡纯化离心管清洗和保存：

1. 使用后用水冲洗干净；

2. 内管加入超纯水500μl，5000×g离心5分钟；

3. 吸净内管中的水，加入500μl 0.1M NaOH，5000g离心20分钟；

4. 用0.1M NaOH 浸泡24小时；

5. 用水冲洗干净；

6. 用无菌水浸泡2-8℃保存。

7. 外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！