酵母高尔基体提取试剂盒

产品概述

高尔基体（Golgi apparatus, Golgi bodies）是由许多扁平的囊泡构成的以分泌为主要功能的细胞器。又称高尔基器或高尔基复合体；高尔基体是由数个扁平囊泡堆在一起形成的高度有极性的细胞器。常分布于内质网与细胞膜之间，呈弓形或半球形，凸出的一面对着内质网称为形成面（forming face）或顺面（cis face）。凹进的一面对着质膜称为成熟面（mature face）或反面（trans face）。顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡，在具有极性的细胞中，高尔基体常大量分布于分泌端的细胞质中。因其看上极像滑面内质网，因此有科学家认为它是由滑面内质网进化而来的。 高尔基体的主要功能将内质网合成的蛋白质进行加工、对比分类、与包装，然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。高尔基体中的酶主要有糖基转移酶、磺基-糖基转移酶、氧化还原酶、磷酸酶、蛋白激酶、甘露糖苷酶、转移酶和磷脂酶等不同的类型。 酵母高尔基体提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母样品中提取高尔基体。提取过程简单方便。 本试剂盒不能用于冷冻酵母样品的高尔基体提取。 本试剂盒提取的为完整的高尔基体，可以用于下游的高尔基体功能研究，或者用于蛋白裂解提取高尔基体蛋白。  可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.提取液Ｂ长期不用时-20℃保存。

2.酵母洗涤液D长期不用时-20℃保存。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

提取

适用样本

酵母

产品应用

根据需要使用

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.涡旋混匀器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

使用方法

1. 酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。

2. 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3. 每100ul体积或100mg湿重酵母沉淀物中加入400ul酵母高尔基体提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。

4. 在1000×g条件下离心5-10分钟，收集酵母沉淀。

5. 用300ul酵母洗涤液D洗涤酵母两次，离心收集酵母。

6. 酵母沉淀物中加入500ul酵母高尔基体提取液B，充分混匀后。

7. 在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。

8. 在2000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。

9. 沉淀用PBS洗涤两次。2000×g离心收集沉淀。

10. 在沉淀中加入400μl酵母高尔基体提取液 C，充分混匀，然后在振荡器上振荡10-30分钟。

11. 在4℃，500×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。

12. 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。

13. 将上清在4℃，5000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。

14. 将上清在4℃，20000×g条件下离心20分钟。弃上清，留沉淀。

15. 在沉淀中加入400μl高尔基体保存液E，混匀。

16. 在4℃，20000×g条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。即得到酵母高尔基体样品。

17. 根据下游实验需要，将沉淀用相应的缓冲溶液重悬。置冰箱备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！