植物高尔基体膜蛋白提取试剂盒

产品概述

植物高尔基体膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物组织样本的高尔基体膜蛋白提取。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

植物

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.涡旋混匀器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

? 最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是蛋白回收率会下降。

? 提取液C在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。

? 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。

? 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。

? 离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：

g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。

使用方法

1. 提取液准备：

每500 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取100-200 mg新鲜植物叶片组织样本，用PBS洗涤干净。

3. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。

4. 加入1000 μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。

5. 用匀浆机/匀浆器充分匀浆。

6. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。

7. 上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。

8. 将上清在4℃，6000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。

9. 上清在4℃，50000×g力条件下离心20分钟。弃上清，留沉淀。

10. 在沉淀中加入500 μl冷的试剂B，混匀。

11. 在4℃，50000×g力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。

12. 在沉淀中加入400 μl蛋白提取液C，吹打混匀后，在4℃条件下振荡15-30分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。

13. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。

14. 将上清吸入另一干净离心管，在37℃水浴（气浴）15分钟。

15. 在37℃， 1000×g离心5分钟。此时溶液分为2层，下层是膜蛋白约为30-50 μl。

16. 小心移除上层，留下下层大约40 μl液体。

17. 用50-100 μl膜蛋白溶解液D溶解下层，即可得到高尔基体膜蛋白样品。

18. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！