线粒体膜/胞浆蛋白提取试剂盒

产品概述

线粒体膜蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体膜蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

动物细胞/组织

产品特点

1.使用方便。

2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.涡旋混匀器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

? 最好使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是线粒体蛋白回收率将可能大幅下降。也可采用超声破碎的方法，建议功率30w，10s间隔10s。采用超声破碎，建议超声过程中镜检，保证细胞80%左右的破碎率，不能超声过度，否则可能会严重破坏线粒体，导致无法回收线粒体蛋白。

使用方法

1. 提取液准备：

根据样本数，每200ul试剂C和试剂D中分别加入1ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置2-8℃备用。

2. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 加入200μl冷的试剂 A，置冰上5-10分钟。

5. 用Dounce匀浆器充分匀浆20-30下。

6. 然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。弃沉淀，留上清。

7. 将上清在4℃，800g条件下离心5分钟。弃沉淀，留上清。

8. 将上清在4℃，11000g条件下离心15分钟。收集上清（I），收集沉淀（I）。

9. 将步骤8中的上清（I）吸入另一预冷的干净离心管，加入200ul试剂C充分混匀，在4℃，12000g条件下离心15分钟，取上清，即得胞浆蛋白。

10. 在步骤8的沉淀（I）中加入200μl冷的试剂B，充分混匀。

11. 在4℃，11000×g条件下离心20分钟。弃上清，留沉淀。

12. 在沉淀中加入200ul冰冷的试剂D，充分混匀，在2-8℃条件下振荡20-30分钟。

13. 在37℃水浴10分钟。

14. 在37℃下1000g离心5分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），下层约为20-40μl。

15. 小心吸取上层丢弃，留下下层溶液，大约30ul。

16. 用50-100μl冰冷的膜蛋白溶解液溶解下层，即得线粒体膜蛋白。

17. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！