植物线粒体蛋白提取试剂盒

产品概述

线粒体（mitochondria）是真核细胞中由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的重要细胞器结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行。 植物线粒体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，用简便快速的方法即可在1小时内提取得到植物线粒体蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组份。 本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

植物

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.涡旋混匀器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

? 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法

1. 提取液准备：

每200 μl预冷的蛋白提取液C中加入1 μl蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。

2. 取200-500mg新鲜植物样本叶片，用PBS洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。

3. 加入1ml提取液A后用匀浆机充分匀浆或者加适量提取液A后用匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。

4. 将匀浆液用100 μm细胞筛过滤。

5. 将滤液在500×g离心5分钟，弃沉淀，取上清。

6. 将上清在800×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。

7. 将上清在2000×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。

8. 将上清12000×g离心20分钟。弃上清，收集沉淀。

9. 将沉淀用500 μl试剂B重悬。

10. 将悬液12000×g力离心20分钟，弃上清，收集沉淀。

11. 在沉淀中加入100-200 μl线粒体蛋白提取液C，充分混匀。

12. 在4℃条件下振荡20-40分钟。

13. 在4℃，14000×g条件下离心15分钟。

14. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到线粒体蛋白。

15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！