线粒体膜蛋白提取试剂盒
产品概述
线粒体膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种动物原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取线粒体膜蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1、 使用方便。
2、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
3、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项:
? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
? 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
? 最好使用标准Dounce匀浆器匀浆,如果没有标准Dounce匀浆器,用普通玻璃匀浆器匀浆也可,但是线粒体膜蛋白回收率可能会下降。
? 最好用新鲜的细胞/组织样本,也可以用冻存的细胞/组织样本,但是线粒体膜蛋白回收率会下降。
? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
? 提取液C在使用前须一直置于2-8℃条件,否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
? 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
? 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
使用方法
细胞样本:
1. 提取液准备:
每200 μl冷的蛋白提取液C中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
每200 μl冷的试剂D中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取2×107个细胞,在4℃,500×g条件下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。贴壁细胞胰酶消化或直接刮下进行相应洗涤即可。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 加入400 μl冷的试剂 A,置4℃条件下持续轻微振荡5-15分钟。用Dounce匀浆器充分匀浆20-30次。
5. 然后在4℃,500×g条件下离心5分钟。弃沉淀,收集上清。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7. 在4℃,11000×g以上条件下离心20分钟。弃上清,留沉淀。
8. 在沉淀中加入200 μl冷的试剂B,混匀。
9. 在4℃,11000×g以上条件下离心20分钟。弃上清,留沉淀。
10. 在沉淀中加入200 μl冷的试剂C,高速涡旋振荡15秒,置4℃条件下持续轻微振荡15-30分钟。
11. 在37℃水浴/气浴10分钟。
12. 在37℃条件下1000-2000×g离心5分钟,此时溶液分为两层(对着光线看),下层约为20-40 μl。
13. 小心吸取上层丢弃,留下下层溶液。
14. 用50-100 μl冰冷的膜蛋白溶解液溶解下层,即得线粒体膜蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织样本:
1. 提取液准备:
每200 μl冷的蛋白提取液C中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
每200 μl冷的试剂D中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取100 mg左右的组织样本,用手术剪刀将组织尽可能剪碎,用PBS缓冲液或生理盐水洗涤干净。
3. 加入适量PBS(或400 μl冷的试剂A),用Dounce匀浆器充分匀浆20-30次。
4. 然后将匀浆液在4℃,500×g条件下离心5分钟。
5. 弃沉淀,将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6. 将上清在4℃,1000×g条件下离心10分钟,弃沉淀,收集上清。
7. 在4℃,11000×g以上条件下离心20分钟。弃上清,收集沉淀。
8. 在沉淀中加入200 μl冷的试剂B,充分混匀。
9. 在4℃,11000×g以上条件下离心20分钟。弃上清,收集沉淀。
10. 在沉淀中加入200 μl冷的试剂C,高速涡旋混匀5秒,置4℃条件下持续轻微振荡20-30分钟。
11. 在37℃水浴/气浴10分钟。
12. 在37℃下1000×g离心5分钟,此时溶液分为两层,下层约为20-40 μl。
13. 小心吸取移除上层,留下下层。
14. 用50-100 μl冰冷的膜蛋白溶解液溶解下层,即得线粒体膜蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
线粒体膜蛋白提取试剂盒信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于线粒体膜蛋白提取试剂盒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应线粒体膜蛋白提取试剂盒外,上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供14?3?3/YWHAQ Protein, Human, Recombinant (GST Tag)、Influenza A H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/1A/2005)、SARS-CoV-2 Spike RBD (L452Q, F490S) Protein (His Tag)等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。