内质网蛋白提取试剂盒

产品概述

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。 内质网蛋白提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网蛋白的提取。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

动物细胞/组织

产品特点

1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2.提取过程简单方便。

3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5.总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.涡旋混匀器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

使用方法

细胞内质网蛋白提取：

1. 提取液制备：

每200 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；

3. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 加入500μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。

5. 用Dounce匀浆器匀浆充分匀浆。

6. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，取上清。

7. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，取上清。

8. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。

9. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。

10. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。

11. 沉淀中加入100-200 μl蛋白提取液C，充分混匀。

12. 在4℃条件下振荡20-30分钟。

13. 即得到内质网蛋白样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

组织内质网蛋白提取：

1. 提取液制备：

每200 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。

3. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。

4. 加入500μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。

5. 用Dounce匀浆器充分匀浆30-40下，至无明显固体团块。

6. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，取上清。

7. 将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，取上清。

8. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。

9. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B，混匀。

10. 在4℃，50000×g力条件下离心45分钟。弃上清，留沉淀。

11. 沉淀中加入100-200 μl蛋白提取液C，充分混匀。

12. 在4℃条件下振荡20-30分钟。

13. 即得到内质网蛋白样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！