高尔基体蛋白提取试剂盒
产品概述
高尔基体蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种动物细胞和实体软、硬组织样本的高尔基体提取。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 高尔基体(Golgi apparatus, Golgi bodies)是由许多扁平的囊泡构成的以分泌为主要功能的细胞器。又称高尔基器或高尔基复合体;高尔基体是由数个扁平囊泡堆在一起形成的高度有极性的细胞器。常分布于内质网与细胞膜之间,呈弓形或半球形,凸出的一面对着内质网称为形成面(forming face)或顺面(cis face)。凹进的一面对着质膜称为成熟面(mature face)或反面(trans face)。顺面和反面都有一些或大或小的运输小泡,在具有极性的细胞中,高尔基体常大量分布于分泌端的细胞质中。因其看上极像滑面内质网,因此有科学家认为它是由滑面内质网进化而来的。 高尔基体中的酶主要有糖基转移酶、磺基-糖基转移酶、氧化还原酶、磷酸酶、蛋白激酶、甘露糖苷酶、转移酶和磷脂酶等不同的类型。高尔基体的主要功能将内质网合成的蛋白质进行加工、对比分类、与包装,然后分门别类地送到细胞特定的部位或分泌到细胞外。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞/组织
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项:
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,注意提取过程保持低温操作,缩短离心时间。
使用方法
细胞高尔基体提取:
1. 提取液准备:
每500 μl冷的蛋白提取液D中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取1-2×107个细胞,在4℃,500×g条件下离心2-3分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 加入400μl冷的试剂 A,置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器充分匀浆几分钟,然后在4℃,1000×g力条件下离心5分钟。
6. 弃沉淀,将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7. 在4℃,3000×g力条件下离心10分钟。
8. 弃沉淀,将上清吸入另一预冷的干净离心管。
9. 在上清中加入10 μl试剂WT,在4℃,20000×g力条件下离心20分钟。
10. 弃上清,在沉淀中加入500μl冷的试剂B,混匀。
11. 在4℃,20000×g力条件下离心30分钟。弃上清,收集沉淀。
12. 在沉淀中加入100-300 μl蛋白提取液D,吹打混匀后,在4℃条件下振荡15-20分钟,至沉淀充分裂解,无明显沉淀。
13. 在4℃,12000×g条件下离心15分钟。
14. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到高尔基体蛋白样品。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织高尔基体提取:
1. 提取液准备:
每500 μl冷的蛋白提取液D中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取50-100mg新鲜动物组织样本,用PBS洗涤干净。
3. 用剪刀尽可能剪碎,用冷PBS洗涤两次。
4. 加入400μl冷的试剂 A,置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器充分匀浆几分钟,然后在4℃,1000×g力条件下离心5分钟。
6. 弃沉淀,将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7. 在4℃,3000×g力条件下离心10分钟。
8. 弃沉淀,将上清吸入另一预冷的干净离心管。
9. 在上清中加入10 μl试剂WT,在4℃,20000×g力条件下离心20分钟。
10. 弃上清,在沉淀中加入500μl冷的试剂B,混匀。
11. 在4℃,20000×g力条件下离心30分钟。弃上清,收集沉淀。
12. 弃上清,沉淀用高尔基体保存液重悬。
13. 在沉淀中加入100-300 μl蛋白提取液D,吹打混匀后,在4℃条件下振荡15-20分钟,至沉淀充分裂解,无明显沉淀。
14. 在4℃,12000×g条件下离心15分钟。
15. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到高尔基体蛋白样品。
16. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
高尔基体蛋白提取试剂盒信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于高尔基体蛋白提取试剂盒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应高尔基体蛋白提取试剂盒外,上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供COQ7 Protein, Human, Recombinant (His Tag)、Influenza A H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008)、C1QBP Protein, Mouse, Recombinant (His Tag)等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。