细菌核糖体蛋白提取试剂盒

产品概述

核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle),主要由RNA和蛋白质构成,其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构，主要由蛋白质（40%）和RNA（60%）构成.核糖体按沉降系数分为两类,一类（70S）存在于细菌等原核生物中,另一类（80S）存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内，有的结集在一起。 细菌核糖体提取试剂盒可用于各种原核细菌样本的核糖体蛋白的提取。 需要用于动物细胞、植物、叶绿体核糖体蛋白提取试剂盒可以联系选择其他货号的产品。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

细菌

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.涡旋混匀器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

使用方法

1. 提取液准备：

每500 μl冷的总蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 收集对数生长期细菌细胞，离心后尽可能吸干培养基。

3. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 每500mg湿重菌体中加入1ml冷的试剂 A和10ul冷的试剂 B，充分混匀，置冰上30分钟。

5. 用高压细胞破碎仪或超声细胞破碎仪破碎细胞。

6. 在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。

7. 将上清在4℃，20000×g力条件下离心30分钟，弃沉淀，收集上清。

8. 将上清在4℃，170000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。

9. 在沉淀中加入400μl冷的试剂C，混匀。

10. 在4℃，170000×g力条件下离心60分钟。

11. 弃上清，在沉淀中加入50-100ul核糖体蛋白提取液D，充分混匀。

12. 即得到核糖体蛋白样品，置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！