革兰氏阴性菌蛋白提取试剂盒

产品概述

革兰氏阳性菌总蛋白提取试剂盒可以从各种革兰氏阳性菌菌体中提取总蛋白，试剂盒适用各种革兰氏阳性菌以及各种厚壁菌体的蛋白提取，也可用于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。提取过程简单方便。 本试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，可以用于不同的下游应用。根据不同的菌液样本以及不同的培养状况，每毫升菌液大概可以提得2-10mg蛋白。采用BCA或Lowry法进行蛋白定量。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

革兰氏阴性菌

产品特点

1.使用方便：不需昂贵设备。

2.可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。

3.将蛋白提取的时间缩短至1小时。

4.采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。

5.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

6.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

7.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

8.本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.匀浆机/匀浆器

4.涡旋混匀器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

? 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

? 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

使用方法

1. 提取液的准备：

根据所需要提取的样本量，每500ul革兰氏阴性菌蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和5ul蛋白稳定剂，充分混匀后置冰上备用。

2. 在4℃，10000×g条件下将菌液离心5分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。

3. 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。

4. 按每50mg-100mg湿重菌体样本加入500ul蛋白提取液，吹打混匀，4℃条件振荡20-30分钟。

5. 在150w-300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。

6. 在4℃， 12000×g条件下将提取液离心5-10分钟。

7. 将上清移入冷的干净离心管，即得革兰氏阴性菌蛋白样品。

8. 将蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！