细胞跨膜蛋白提取试剂盒

产品概述

动物跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。跨膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此跨膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。 细胞跨膜蛋白提取试剂盒是一种高效的高产跨膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂，适用于从动物细胞和组织温和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白复合物。用本试剂盒抽提和富集到的蛋白包括从分子量很小到很大的蛋白，单次跨膜至7次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白复合物。提取过程简单方便。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

动物细胞

产品特点

1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2.提取过程简单方便。

3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.匀浆机/匀浆器

4.涡旋混匀器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

使用方法

A． 细胞跨膜蛋白提取

1. 提取液准备：

每500ul冷的蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。

每500ul膜蛋白溶解液C中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。

2. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 细胞样品中加入200μl冷的试剂 A，高速涡旋振荡5秒，置2-8℃振荡20分钟-1小时。

5. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，13000×g条件下离心5分钟。

6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，37℃水浴10分钟.

7. 在37℃条件 500-2000g离心3分钟，此时溶液分为两层，下层是跨膜蛋白约为20-40μl。

8. 小心移除上层。下层粘稠状液体即为跨膜蛋白样品。

9. 用150-200μl冰冷的试剂B稀释下层跨膜蛋白，混匀后冰浴2分钟，37℃水浴10分钟，37℃条件下 2000g离心3分钟，此时溶液分为两层，下层是跨膜蛋白部分约为20-40μl。

10. 按步骤7再次抽提下层(此步骤可以选做)。

11. 小心移除上层。用50-200μl冰冷的试剂C溶解下层，即得跨膜蛋白。

12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

B． 组织跨膜蛋白提取

1. 取适量组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入冷的蛋白提取液A，用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。

2. 按照细胞蛋白的提取方法的第3步骤往下操作即可。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！