核蛋白和胞质蛋白提取试剂盒
产品概述
胞质蛋白和核蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取核蛋白和胞质蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞质蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项:
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,注意提取过程保持低温操作,缩短离心时间。
使用方法
细胞蛋白提取
1. 提取液准备:
每200 μl蛋白提取液A中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
每200 μl蛋白提取液B中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞,在4℃,1000×g条件下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每20 μl体积细胞沉淀(约20 mg,2×106个细胞)中加入200-300 μl冷的提取液 A,高速涡旋振荡15秒或吹打混匀,置2-8℃条件振荡15-30分钟。
5. 然后在4℃,1000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞质蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次,在4℃,1000×g条件下离心5分钟,弃上清。
8. 在沉淀中加入200 μl冷的提取液B,高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30分钟,至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
10. 在4℃,14000×g条件下离心10分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织蛋白提取
1. 提取液制备:
每200 μl蛋白提取液A中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
每200 μl蛋白提取液B中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取适量组织样本,用手术剪刀尽可能剪碎,加冷PBS,用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体,冰上静置5分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
3. 在4℃,500×g条件下离心5分钟,弃上清。
4. 每20 mg组织(20-30 μl细胞沉淀体积)中加入200 μl冷的提取液 A,高速涡旋振荡15秒或吹打混匀,置2-8℃条件振荡20-30分钟。
5. 然后在4℃,1000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞质蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次,在4℃,1000×g条件下离心5分钟,弃上清。
8. 在沉淀中加入100-200 μl冷的提取液B,高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30-40分钟,至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
10. 在4℃,12000×g条件下离心10分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
核蛋白和胞质蛋白提取试剂盒信息由上海博尔森生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于核蛋白和胞质蛋白提取试剂盒报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。除供应核蛋白和胞质蛋白提取试剂盒外,上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供GFP Protein, Aequorea victoria, Recombinant (His Tag)、Human KRAS / K-Ras (G12C, Q61H) Protein (His Tag)、Human KRAS / K-Ras (G12D & Q61H) Protein (His Tag)等产品,公司有专业的客户服务团队,是您值得信赖的合作伙伴。