植物磷酸化蛋白富集试剂盒

产品概述

植物样本磷酸化蛋白富集试剂盒是利用磷酸基团与金属的亲和力，采用固定化金属螯合层析（IMAC）的方法富集磷酸化蛋白。可以选择性的对磷酸化蛋白和多肽进行富集和纯化。本试剂盒可以用来提取富集植物样本的的磷酸化蛋白。如需要做其他样本的磷酸化蛋白富集，选择其他货号的试剂盒。 经本试剂盒制备的蛋白样品可用于Western blotting, mass spectrometry, 2D-PAGE 和protein arrays等下游应用。 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

植物

产品应用

WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.匀浆机/匀浆器

4.涡旋混匀器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

蛋白样品中不可含EDTA。

每个柱的载量约为1mg磷酸化蛋白。

上样蛋白样品pH值必须低于6，蛋白浓度在0.25-0.5mg/ml。

洗涤细胞和组织是不能用PBS等磷酸盐缓冲液，要用非磷酸盐缓冲液，如50mM HEPES，Tris等或生理盐水。

可以根据自己实验需要加入其它磷酸酶抑制剂单品。

用蛋白柱进行磷酸化蛋白富集，需要离心操作时将蛋白柱置于一个50ml离心管离心即可。

最终蛋白样品用于2D电泳前需脱盐。

使用方法

一、蛋白样品的准备：

以下为由新鲜植物细胞和组织制备蛋白样品的参考步骤，其它方法得到的蛋白样品稀释至蛋白浓度为0.25-0.5mg/ml后直接上样即可，确保蛋白样品的pH值低于6。

可以用试剂盒中的洗柱液、裂解液、洗涤液稀释蛋白样品。

植物组织蛋白提取：

1、 裂解液制备：

每500 μl冷的蛋白裂解液中加入2 μl蛋白酶磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。

2、 取200 mg植物组织样本，去除粗筋脉络等后洗净擦干，用手术剪刀剪碎，加入500 μl蛋白裂解液B，然后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。

3、 将匀浆液吸入一个预冷的干净离心管中在4℃条件下振荡2-3小时。

4、 在4℃，14000×g条件下离心15分钟。

5、 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

二、柱平衡：

加入500 μl洗柱液洗柱，重力作用下自然流下或4℃下500×g力离心1分钟甩干吸附柱。

三、上样：

将以上蛋白裂解液或其它待富集蛋白样品加入吸附柱，重力作用下自然流下或4℃下500×g力离心1分钟甩干吸附柱。

四、洗柱：

加入300 μl洗涤液洗柱，重力作用下自然流下或4℃下500×g力离心1分钟甩干吸附柱。重复两次。

五、洗脱：

加入500 μl磷酸化蛋白洗脱液，重力作用下自然流下或4℃下1000×g力离心1分钟甩干吸附柱，收集洗脱液，即得到磷酸化蛋白。

六、柱保存和柱再生：

磷酸化蛋白纯化柱如果保存和处理得当的话可以多次重复使用。

使用后可以用1ml 0.1 M EDTA溶液洗柱，然后在柱中加入20%乙醇溶液密封，置2-8℃保存。

加入0.1 M 氯化铁溶液，浸泡蛋白柱填料，即可对蛋白柱进行再生。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！