活性蛋白提取试剂盒

产品概述

活性蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代培养动物细胞和各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织样品中提取活性蛋白。配合其他试剂时，也可以用于植物、细菌、真菌、酵母等样品的活性蛋白提取。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等

适用样本

动物细胞/组织

产品特点

1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。

2.提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

5.活性蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。

6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用

WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.匀浆机/匀浆器

4.涡旋混匀器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项：

旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

Western Blot实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubulin。

使用方法

细胞活性蛋白提取：

悬浮细胞蛋白提取：

1. 提取液准备：

每500ul冷的活性蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取5×106个细胞，在4℃，2500g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 每5×106 -1×107个细胞（大约50mg细胞/50ul细胞压积）中加入500ul冷的活性蛋白提取液，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，无明显细胞沉淀。

5. 在4℃，12000g条件下离心15分钟。

6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到活性蛋白。

7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

贴壁细胞蛋白提取：

1. 提取液准备：

每500ul冷的活性蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 小心吸取贴壁细胞的培养液。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干PBS。

4. 加入适量冷的活性蛋白提取液，振荡15-30分钟，至细胞充分裂解，用细胞刮刀刮一遍，将裂解液吸入另一干净离心管。

5. 在4℃，12000g条件下离心15分钟。

6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到活性蛋白。

7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织活性蛋白提取：

1. 提取液准备：

每500ul冷的活性蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取50-100mg组织样本，用PBS洗干净，然后用手术剪刀尽可能剪碎，加入500ul活性蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。

3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡10-20分钟。

4. 在4℃，10000-14000g条件下离心15分钟。

5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到活性蛋白。

6. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！