Ca2+钙离子检测试剂盒-红色荧光

产品概述

钙离子检测试剂盒采用Fura Red细胞内钙离子浓度荧光探针检测钙离子浓度水平的变化。 Fura Red是一种可见光激发的钙离子荧光探针，可以通过其结合钙离子后的荧光强度变化情况反应钙离子浓度。Fura Red荧光探针采用可见光激发，与传统的紫外光激发的荧光探针相比，仪器的适用范围更广泛，降低了对活细胞的光毒性，检测敏感度更高。Fura Red也可以与其它的单激发的，绿色荧光钙指示剂一起联合使用，进行单细胞中的钙离子浓度定量比率测量。 钙离子浓度变化是活细胞接受外界刺激后产生级联反应的重要信息传递方式，因此细胞内钙离子检测是信号转导G蛋白偶联受体（GPCR）介导的相关药物筛选以及其他相关实验中非常重要的一种研究手段。 Fura Red的激发波长为450-500 nm，超长的发射波长的最da值为660 nm，可以最da限度地减少组织和生物体液中自发荧光和色素沉着的干扰。Fura Red的巨大Stokes位移使得Fura Red荧光可以与荧光素或荧光素样染料结合使用进行仅一个激发波长的多色分析。例如，研究人员已经能够同时测量单核细胞和粒细胞中的Ca2 +通量和氧化应激，同时测量Fura Red和二氢罗丹明123检测活性氧。Fura Red还可以与转染细胞中的蓝色荧光蛋白结合使用进行多色标记。 Fura Red指示剂的荧光比其他可见光可激发的Ca2+指示剂的荧光弱，因此需要在细胞中使用更高浓度的指示剂来产生等效荧光。 本试剂盒采用Fura Red，AM标记细胞内钙离子，Fura Red，AM具有极高的细胞渗透性，经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的Fura Red新产物，从而被滞留在细胞内。当它与细胞内钙离子结合后荧光强度减弱，使用激发波长为 450-500 nm，最da发射波长为 660nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的 M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.染料长期不用可以-20℃保存。

2.避免反复冻融。可以根据需要小量分装保存。

3.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

4.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否则容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

5.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

6个月

检测方法

1.流式细胞仪

2.荧光显微镜

3.激光共聚焦

适用样本

1.悬浮细胞

2.贴壁细胞

产品应用

流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦

仪器准备

1.激光共聚焦/荧光显微镜//光度计/流式细胞仪

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液 2.HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.钙离子染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

3.探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。

4.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

5.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

6.染色后立即进行分析。

7.Fura Red，AM探针容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。

8.Fura Red，AM探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。

9.未使用完的Fura Red，AM探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。母液遇水极易分解，如果长期不用，建议根据每次使用量分装保存，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。

10.Fura Red，AM探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。

11.Fura Red，AM融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。

12.可以在染色工作溶液中加入20% Pluronic F127溶液（可选步骤），Pluronic F127 可以帮助Fura Red，AM更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存 Fura Red，AM溶液。

13.如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（最终浓度为1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM）添加到染料工作溶液中，以减少脱酯化探针的泄漏。

14.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最jia条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最jia实验条件。以下方法仅供参考。

使用方法

1. 染色工作液的配制：

用 HBSS 稀释Fura Red，AM溶液200倍-400倍，配制成Fura Red，AM染色工作液。

2. 收集培养好的待测细胞样本，用HBSS洗涤细胞3次。

3. 离心去上清后，将Fura Red，AM染色工作液加入细胞，在37℃孵育20 -60分钟。

4. 在室温下再继续孵育20-40分钟。

5. 用HBSS洗涤细胞1-2次。

6. 用HBSS重悬细胞。

7. 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。

激发波长 488nm，发射波长660nm。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！