细胞内pH值检测试剂盒（定量全套）（绿色荧光）

产品概述

细胞内pH（Intracellular pH，pHi）是酶活性和细胞功能的重要生理决定因素，所有蛋白质都依赖于严格调节的pH值以维持其结构和功能。质子 - 去质子化可以指示生物表面的电荷，并且是许多代谢反应中的组成部分。此外，跨线粒体膜的质子梯度用于产生细胞能量并支持其他线粒体过程。因此，细胞已经开发出多种机制来保持pHi的窄范围，以响应pH值的细胞内和细胞外波动。 细胞内pH值检测试剂盒采用P01细胞内pH值荧光探针检测胞内pH值的变化。P01是pH敏感的荧光染料，其在碱性条件下荧光强更高，反之酸性条件下变低，从而P01可被用于监测细胞内pH变化，见图一。P01是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，P01本身没有荧光，穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成荧光物质，从而被滞留在细胞内。产生的荧光物质最da激发波长为 502 nm，最da发射波长为 528 nm，其在不同的pH值条件下发射的荧光强度不同，从而可以反映细胞内pH值得变化情况。 P01主要用于哺乳动物细胞的研究，也可用于其他动物组织、植物细胞、酵母等的细胞内pH水平检测。在有细胞内pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为488 nm左右，发射波长为 525～540 nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内pH值的变化。 本试剂盒内P01探针母液500-5000倍稀释后使用，一般1000-2000倍稀释使用即可，按每个样500 μl计算，50 μl母液至少可以做100-200个样品。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

1.探针长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。

2.探针A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

4.P01探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。

5.吸取P01探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。

6.未使用完的P01探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。

有效期

6个月

检测方法

流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜

适用样本

细胞

产品应用

流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜

仪器准备

1.流式细胞仪或激光共聚焦或荧光显微镜

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液 2.HBSS 3. （备选）Nigericin sodium salt

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

2.pH探针为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

3.P01探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。

4.吸取P01探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。

5.未使用完的P01探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。

6.P01探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。

7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

8.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最jia条件。以下方法仅供参考。

9.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

10.染色后立即进行分析。

11.可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127 可以帮助P01更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存P01溶液。

12.本试剂盒主要用于细胞内pH值变化的定性检测。但是在一定pH值范围内荧光强度与细胞内pH有良好的线性关系，据此可以用特定的pH值的标准缓冲液制备标准曲线，从而可以换算出细胞内的pH值的具体数据。

使用方法

1. 染色工作液的配制：

根据样品数，用用HBSS缓冲液将P01探针稀释P01溶液200倍-1000倍，配制成P01染色工作液。

2. 将 P01染色工作液加入已处理好的细胞，在37℃孵育30-60 分钟。

3. 用PBS或HBSS洗涤细胞2-3次。用HBSS重悬细胞。

4. 然后用该细胞进行荧光细胞内pH变化情况检测。

激发波长 488-506 nm，发射波长526-536 nm。 PH标准曲线的绘制： 1. 样本细胞用P01探针染色。

2. 从样本细胞悬液中取3×106个/ml细胞，离心清洗后用适量的pH标定缓冲液混合，制成细胞悬液。

3. 加入nigericin，终浓度10-50 uM，孵育约10分钟后，测定荧光强度。激发波长 440 nm和488 nm，发射波长526-536 nm。

4. 以缓冲液的pH值为横轴，以440 nm激发波长的荧光值F1与488 nm激发的荧光值F2的比值R=F2/F1为纵轴作图，绘制标准曲线。

5. 根据标准曲线计算待测样本细胞的pH值。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！