细胞质染色试剂 Calcein, AM

产品概述

细胞质染色试剂Calcein-AM是绿色荧光标记的细胞质探针，具有490 / 515nm的zui大激发/发射波长。 Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，Calcein-AM由于在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate）相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。 Calcein的激发和发射波长分别为490 nm和515 nm。Calcein -AM仅对活细胞染色。 Calcein, AM和PI经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.长期不用可以-20℃保存。

2.染色液Calcein AM注意防潮；避免反复冻融。

3.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。

4.注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。

5.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

6个月

检测方法

荧光显微镜/激光共聚焦

适用样本

动物细胞

产品应用

荧光显微镜/激光共聚焦

仪器准备

1.荧光显微镜/激光共聚焦

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液 2.HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

3.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

4.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

5.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定zui佳条件。

6.以下方法仅供参考，根据需要使用，或者参考文献的使用方法。

7.染色后立即进行分析。

8.本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。

9.由于Calcein-AM的工作液稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。

10.Calcein-AM对湿度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。

11.试剂A母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。

12.参考：可以使用以下方法来优化得到荧光染料的zui佳工作浓度。1) 用0.1%皂素或者0.1-0.5%地高辛孵育细胞10min，或者用70%乙醇孵育细胞30min，从而制备死细胞；2) 用15000倍-1500倍稀释（试剂盒中的母液）的PI溶液进行死细胞染色，以得到仅仅对细胞核染色，而不会对细胞质染色的zui佳工作浓度。3) 用1000倍-100倍稀释（试剂盒中的母液）的Calcein-AM进行死细胞染色，以得到不会对细胞质染色的zui佳工作浓度。然后用此浓度进行活细胞染色，去观察是否活细胞能被染色。

使用方法

1. 染色工作液的配制：

根据样品数按下列比例配制染色工作液。

用HBSS缓冲液或无血清培养基将染色液1000倍稀释，充分混匀，即成染色工作液A。

2. 收集样本细胞。

3. 用PBS洗涤细胞两次。

4. 用200ul染色工作液将细胞重悬。

5. 在室温或37℃避光孵育15-20分钟。

6. 用PBS洗涤细胞。

7. 用适量PBS重悬细胞。

8. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。zui大激发为490nm，zui大发射波长为515nm和617nm。

结果分析 ：

荧光显微镜下，使用488nm波长激发，活细胞为黄绿色。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！