丙酮酸检测试剂盒
产品概述
丙酮酸(Pyruvic acid,PA)又称2-氧代丙酸,是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一,可通过乙酰CoA和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化,丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。丙酮酸是糖无氧代谢的产物,科研工作者常将丙酮酸和乳酸一起研究,并用二者的比值推算循环衰竭的程度。 丙酮酸检测可采用酶催化法,该发是使用乳酸脱氢酶(LDH)催化丙酮酸氧化,生成乳酸和NAD+,通过分光光度法或荧光光度法测定NADH的减少量,进而计算出丙酮酸含量。 丙酮酸检测试剂盒(二硝基苯肼比色法)检测原理是在酸性条件下,丙酮酸与二硝基苯肼反应,生成丙酮酸丙酮酸-二硝基苯腙复合物,后者经氧化呈樱桃红色,通过酶标仪测定520nm处吸光度,据此通过与标准曲线对比可以计算出PA水平。 本试剂盒可用于检测植物、细胞或组织、血浆、血清等各种样品中内源性的丙酮酸含量的检测。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
开盖后组份按要求条件保存。
有效期
6个月
检测方法
酶标仪
适用样本
血清血浆、尿液、细胞、组织等,
产品应用
酶标仪
仪器准备
1.酶标仪
2.恒温箱
3.混匀器
4.移液器
5.冰盒
试剂准备
1.纯水
耗材准备
1.96孔板
2.吸头
使用注意事项
1.抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好。抗凝血样品置于冰浴中送检,尽快分离出血浆等。
2.如果没有酶标仪,也可以使用分光光度计测定,检测样品量会相应减少;
使用方法
样品准备:
1. 血浆、血清、尿液及其他体液样品:
血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-20℃冻存。
2. 细胞或组织样品:
取0.5g组织样品,加入组织匀浆液,仔细研磨,转移至新的离心管中,清洗研磨器一并倒入离心管中,补组织匀浆液至9ml,充分混匀,4000g离心10min,取上清,-20℃冻存,用于丙酮酸的检测。
3. 高浓度样品:
如果样品中含有较高浓度的丙酮酸,可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释,如鸡血清、血浆可稀释5~10倍后检测。
4. 植物样本:
称取100mg植物样本置于研钵内,加入适量组织匀浆液仔细研磨,用匀浆液定容至1ml,振摇提取,静置30min,取上清液4000g离心10min,取上清液备用。
配制标准品工作液:
如果检测血清、血浆、尿液等样品,取丙酮酸标准(6mg/ml),按取丙酮酸标准(6mg/ml):蒸馏水=1:99的比例配制,使浓度达到60μg/ml;
如果检测组织样品,取丙酮酸标准(6mg/ml),按丙酮酸标准(6mg/ml):组织匀浆液B=1:99的比例配制,使浓度达到60μg/ml。4℃避光保存24h有效。
加样:
按照下表设置空白孔、标准孔、样品孔,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的丙酮酸浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品检测最hao能设置平行管。
丙酮酸检测:
充分混匀,其中空白呈淡黄色,标准孔依次呈不同程度的棕红色;用酶标仪,空白孔调零,比色杯光径1.0cm,测定标准孔、样品孔的520nm吸光度(即A标准,A样品)
计算:
以各丙酮酸标准浓度为横坐标,以各丙酮酸标准A标准为纵坐标,绘制丙酮酸标准曲线。
血清、血浆、尿液等的丙酮酸含量直接根据标准曲线求得。
组织丙酮酸(mg/g)=A x N/(M x 100)
式中:A为从标准曲线上查的丙酮酸浓度(ug/ml)
N为稀释倍数
M为样品的质量(g)
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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