总蛋白检测试剂盒

产品概述

总蛋白检测试剂盒(双缩脲微板法)多用于人或动物血清、血浆、组织等样本中的总蛋白含量测定。 双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物，呈紫色，所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂影响。 总蛋白(Total Protein，TP)由白蛋白和球蛋白组成。对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。可以提供针对不同下游实验应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

1.常温运输，2-8℃保存。

2.蛋白标准配制成溶液后应-20℃冻存。

有效期

一年

检测方法

酶标仪

适用样本

血浆、血清、组织

产品应用

酶标仪

仪器准备

1.酶标仪

2.恒温水浴锅

3.离心机

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.纯水

耗材准备

1.96孔板

2.试管

3.吸头

使用注意事项

1.蛋白标准粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液，该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存。

2.待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置1h或60℃放置15min，颜色会随着时间的延长不断加深。

3.测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有铜离子螯合剂。

4.如果没酶标仪，也可以使用分光光度计测定。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

5.检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品含有还原剂，应适当透析或稀释样品。

6.待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。

7.当遇到浑浊或溶血样本等，可设”样本空白孔”：取20μl待测样品加入200μl双缩脲空白试剂，以双缩脲空白试剂调零，读取样本空白孔吸光度。用待测孔吸光度减去标本空白孔吸光度后的净吸光度，计算总蛋白浓度。

使用方法

一、试剂的前处理：

取1ml蛋白标准配制液C或稀释液加入到蛋白标准B中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。亦可按自己试验要求继续进行稀释，如稀释至1mg/ml。

【注】：

待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl或PBS作为溶解白蛋白标准品的稀释液。

二、样本的处理：

1.血清、血浆样本直接取20μl检测。

2.对于组织样本，按组织质量(g)：生理盐水=1：9比例，加入9倍体积的生理盐水或PBS，冰浴下匀浆后，2500g离心10min，取20μl上清待检。

三、加样

TP加样操作，按下表设置系列孔，溶液应按顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

如果样品浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

样品的检测最hao设置平行孔。

四、TP测定

混匀, 37℃孵育10min。

酶标仪测定540nm波长处的吸光度。

如无540nm，520～562nm之间的波长也可。以空白孔调零，读取标准孔和各待测孔的吸光度。

五、计算

总蛋白(g/L)=(测定孔吸光度/标准孔吸光度)×蛋白标准液浓度(g/L)

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！