蛋白质总巯基检测试剂盒（总半胱氨酸巯基）

产品概述

总巯基检测试剂盒是利用经典的Ellman法进行总巯基检测的试剂盒。试剂盒准确性高，重复性和抗干扰性强，使用方便，可用于测各种蛋白质、抗体等液体样本。 本试剂盒用于测定蛋白质中的总半胱氨酸巯基，如果需要测定游离巯基，可以选择其它货号的试剂盒。 生物体内活性巯基（SH）主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。谷胱甘肽巯基能够修复氧化损伤的蛋白质，参与活性氧清除。蛋白质巯基主要存在于半胱氨酸，是蛋白质结构和生物体内某些氧化还原反应重要基团，在蛋白质结构中2个巯基脱氢而形成的双硫键，使相邻多肽得以连接．对于维持蛋白质完整结构作用十分重要。 巯基还是很多酶的活性基团，一些重金属盐如Hg2+等与酶巯基结合，影响酶活性。巯基化合物与机体许多机能活动，药物及毒物的作用以及某些疾病的发生发展有着密切关系。 所有动物组织都含有不同量的活性巯基，测定组织和血液中巯基含量已日益为人们所重视,以期探索对某些疾病的发生机理、治疗、预防以及预后判断等方面的研究意义。 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。 可以提供各种细胞、组织染色，免疫组织化学，细胞培养等相关试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

1.试剂拆封后请尽快使用完！

2.试剂A低温保存后可能会有结晶析出，可以置室温摇匀溶解或者37℃水浴溶解摇匀。

有效期

6个月

检测方法

分光光度计

适用样本

蛋白质、抗体等

产品应用

分光光度计

仪器准备

1.分光光度计

2.恒温水浴锅

3.涡旋混匀器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.生理盐水

2.纯水

3.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.比色皿

2.试管

3.吸头

4.一次性手套

使用注意事项

1.试剂A低温保存后可能会有结晶析出，可以置室温摇匀溶解或者37℃水浴溶解后摇匀再使用。

2.试剂B2干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失。

3.试剂C2干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失

使用方法

试剂配制：

1. 使用前，准确吸取10 ml试剂B1加入试剂B2干粉，充分溶解混匀，即成试剂B工作液，4℃避光保存备用。

2. 使用前，准确吸取10 ml试剂C1加入试剂C2干粉，充分溶解混匀，即成试剂C工作液，4℃避光保存备用。

【注】：

一次用不完的试剂工作液可以根据实验需要分装后-20℃冻存。

样本处理：

1. 蛋白质/抗体等液体样本：直接检测或稀释后检测。

检测前进行蛋白浓度测定（mg/ml，g/L）。

2. 固体粉末用试剂A溶解后测定。蛋白浓度范围在1-10mg/ml均可。

进行蛋白浓度测定（mg/ml，g/L）。

总巯基的测定

1. 待测蛋白样品100 μl加入700 μl试剂A，充分混匀，室温或37℃静置1-4小时。

2. 再加入100 μl试剂B工作液，充分混匀，在室温或37℃静置10-30分钟。

3. 加入100 μl试剂D，充分混匀。

4. 冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。

【注】：

可以4℃静置过夜。

5. 在4℃，12000×g以上条件下离心10分钟。

6. 小心移除上层清液丢弃，留沉淀。

【注】：

尽可能吸干液体，小心不要吸走沉淀。

7. 加入100 μl试剂E到离心管中，洗涤沉淀。在4℃，12000×g条件下离心10分钟。小心移除弃上清，留沉淀。

【注】：

重复此步骤两次。

尽可能吸干液体，小心不要吸走沉淀。

8. 用900 μl试剂F溶解沉淀。

【注】：

用移液器充分吹打混匀。

沉淀不好溶解时可以超声助溶。

9. 加入100 μl试剂C工作液，充分混匀。

10. 置室温静置10分钟。412 nm，0.5 cm光径，测定OD值。

巯基含量计算：

总半胱氨酸巯基含量（mmol/g ；mmol-SH/g-Protein）

= 测定吸光度÷14.15÷0.5×10÷蛋白含量（g/L）

【注】：

以上以0.5cm光径检测设备为例，如果实际使用的检测设备是采用1cm光径，将计算公式中的0.5换成1即可。

【注】：

14.15 mM/cm为毫摩尔消光系数；

0.5 cm为光径；

10 为反应总体积/样品取样量

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！