总巯基检测试剂盒

产品概述

巯基检测试剂盒是利用经典的Ellman法进行总巯基检测的试剂盒。试剂盒准确性高，重复性和抗干扰性强，使用方便，可用于测各种动物的血清/血浆、组织、细胞、培养液以及植物组织样本等。 Ellman试剂是一种通用的水溶性化合物，用于定量溶液中的游离巯基。该化合物的溶液在与巯基反应时会产生可测量的黄色产物。因此，Ellman试剂非常适合用作巯基测定试剂，因为它在反应缓冲液中对-SH基团具有特异性，摩尔消光系数高且反应时间短。 本试剂盒用于各种样品中的游离巯基，如果需要还原所有二硫键，测定总半胱氨酸巯基，可以选择其它货号的试剂盒。 生物体内活性巯基（SH）主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。谷胱甘肽巯基能够修复氧化损伤的蛋白质，参与活性氧清除。蛋白质巯基主要存在于半胱氨酸，是蛋白质结构和生物体内某些氧化还原反应重要基团，在蛋白质结构中两个巯基脱氢而形成的二硫键，使相邻多肽得以连接．对于维持蛋白质完整结构作用十分重要。 巯基还是很多酶的活性基团，一些重金属盐如Hg2+等与酶巯基结合，影响酶活性。巯基化合物与机体许多机能活动，药物及毒物的作用以及某些疾病的发生发展有着密切关系。 所有动物组织都含有不同量的活性巯基，测定组织和血液中巯基含量已日益为人们所重视,以期探索对某些疾病的发生机理、治疗、预防以及预后判断等方面的研究意义。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

开盖后组份按要求条件保存。

有效期

6个月

检测方法

微孔板，酶标仪

适用样本

血清、血浆、尿液、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液

产品应用

微孔板，酶标仪

仪器准备

1.酶标仪

2.混匀器

3.匀浆器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

使用注意事项

1.试剂B2干粉开盖使用前先敲入瓶底部，防止开盖时洒落导致损失。

2.待测样品中不能含有DTT或β-巯基乙醇 （BME，2-ME）等。

3.测定复杂蛋白质样品时，如果需要将内部巯基完全暴露，可以用盐酸胍变性剂处理需要测定的蛋白质样品，有助于将内部巯基完全暴露。不推荐将尿素用作变性剂，因为它会形成与巯基发生反应的氰酸盐。

4.如果需要还原待测蛋白质样品的二硫键，测定所有的二硫键巯基，可以使用DTT或β-巯基乙醇 （BME，2-ME）还原剂处理待测蛋白样品，但是注意一定要完全去除还原剂DTT和β-巯基乙醇，因为它们会引入巯基。可以采用透析或脱盐的方法去除还原剂DTT和β-巯基乙醇。

注意避免还原分子的样品损失，尽可能完全回收还原蛋白质/肽。

在还原过程中，向样品缓冲液中加入 5-20 mM EDTA 有助于防止二价金属（如 Zn2+、Cu2+ 和 Mg2+）对巯基进行再氧化。

还原样品应在还原后立即进行测定，因为二硫化物会随时间重新形成。

5.血清/培养液等液体样本直接检测或稀释后检测。

6.动物、植物组织：按照组织质量（g）：生理盐水或PBS体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1 g 组织，加入1 mL 生理盐水或PBS等缓冲液）进行冰浴匀浆，然后8000×g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

使用方法

1. 试剂配制：

使用前，准确吸取10 ml试剂B1加入试剂B2干粉，充分溶解混匀，即成试剂B工作液（ELLMAN试剂），4℃避光保存。

2. 样本处理

血清/培养液等液体样本：直接检测或稀释后检测。

蛋白质粉末：用水溶解后检测。

动物、植物细胞组织：按照组织质量（g）：生理盐水或PBS体积(mL)为1：5-10 的比例（建议称取约100 mg 组织，加入1 mL 生理盐水或PBS等缓冲液）进行冰浴匀浆，然后8000×g，4℃离心15 min，取上清，置冰上待测。

3. 总巯基的测定

按下表在96孔板中加入试剂，同时做空白孔（无样品液）、样品对照孔（无ELLMAN试剂），空白孔做一个即可，对照孔每个样品均做。

充分混匀，置室温静置15分钟。412 nm，以反应缓冲液试剂A调零。

测定各管OD值：A测定、A空白、A对照。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！