乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒

产品概述

乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH或LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应，其反应公式：乳酸+NAD+→丙酮酸+NADH+H+。 乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒检测原理是丙酮酸与二硝基苯肼反应，生成丙酮酸二硝基苯腙，呈棕红色，其颜色深浅与丙酮酸浓度呈正比，通过分光光度计检测440nm处吸光度，通过测得的丙酮酸钠含量计算酶的活性。本试剂盒可用于检测细胞或组织、血浆、血清等各种样品中乳酸脱氢酶（LDH）含量的检测。可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

1.试剂C避免反复冻融，试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

6个月

检测方法

分光光度计

适用样本

细胞/组织/血清血浆/尿液

产品应用

分光光度计

仪器准备

1.分光光度计

2.水浴锅

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

1.纯水

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.血清或肝素抗凝血浆检测效果较好；草酸类、EDTA抗凝剂对LDH活性有抑制作用；

2.避免使用溶血样本；

3.提取出来的血清样本不宜冰箱放置，应室温放置3天有效；

4.处理后的样品应及时检测，否则易失效；

5.比色应在3-10min内完成，否则吸光度值会下降。

使用方法

样品准备：

1. 血浆、血清样品：

血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，室温保存3天，用于LDH的检测；

2. 细胞或组织样品：

取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，室温保存3天，用于LDH的检测。

3. 长期保存样品：

如果提取后的样品无法及时检测，需要放置时间较长，按下列方法操作：取LDH保护剂1支，加入1.0ml的LDH保护稀释液，配制成LDH保护工作液，-20℃避光保存。按待测样品(如血清)：LDH保护工作液=9:1的比例混合，4℃避光保存。

4. (选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的LDH含量。

制作标准曲线：

用试剂B（LDH 检测缓冲液）准确稀释试剂A（丙酮酸标准（5mmol/L））至0.5 mmol/L，按下表制备标准曲线。

碱性显色工作液的配制：

取适量的碱性显色液，按碱性显色液：纯水=2:3的比例混合，即为碱性显色工作液。

LDH酶促反应：

按照下表设置对照管、标准管、样品管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

LDH检测：

充分混匀，室温放置5min。用分光光度计测定，用纯水调零，比色杯1.0cm光径，测定各管的440nm吸光度。记为A空白、A标准、A对照、A测定

活力单位定义及计算：

LDH活性蛋白的定义：

在37℃，100ml血清中LDH 15min催化底物产生1umol丙酮酸为一个LDH金氏酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的LDH活性。

以标准管酶活力单位为横坐标，以吸光度（A标准-A空白）为纵坐标，绘制标准曲线。

用样品管与对照管吸光度值之差（A样品-A对照）在标准曲线上查出待测样品的LDH酶活力单位。

A空白为空白管的吸光度；

A标准为标准管的吸光度；

A样品为样品管的吸光度；

A对照为对照管的吸光度；

【注】：

如果待测样品加入LDH保护工作液，其结果应除以0.9。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！