氢-钾 ATP酶（H+、K+-ATPase）检测试剂盒

产品概述

H+、K+－ATPase对胃酸的分泌及胃的消化功能具有重要的生理意义。70年代Forte等人首先在牛蛙胃粘膜上分离出一类能被K＋专一激活而不被乌本苷抑制的ATPase，即H+、K+－ATPase。随后Lee•J等人又证明了含有该酶的膜囊泡运动跨膜运输质子的作用，从而为胃酸分泌的机理奠定了分子学基础。H＋、K＋-ATPase定位于胃粘膜壁细胞上，属于第二类质子泵，它通过自身的磷酸化（E1→E2）与去磷酸化（E2→E1）完成的H＋/K＋电中性跨膜离子转运，不断将壁细胞内的质子运输到膜外行使泌酸的功能。 ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷，测定无机磷的量可判断ATP酶活力的高低。 H＋K＋—ATP酶是一种能被钾专一激活而不被乌本苷抑制的ATP酶。 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

开盖后组份按要求条件保存。

有效期

6个月

检测方法

分光光度计

适用样本

组织、细胞样本

产品应用

分光光度计

仪器准备

1.分光光度计

2.恒温水浴锅

3.离心机

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

7.涡旋混匀器

试剂准备

1.纯水

2.生理盐水

3.BCA蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3.该试剂盒具有微量、灵敏及快速的特点。所用的试管不能含有磷。如果试管放过磷酸或磷酸缓冲液，一定要洗的非常干净，最hao用一次性塑料或新玻璃管，避免磷污染是检测成败的关键；

4.定磷剂配好后，不可放置太久，一般保存1-5天，最hao现配现用，随时放冰箱；

5.最hao采用先配A、B两种混合液，然后按简化操作步骤进行检测。快捷准确。

6.所有配试剂的器皿均要专用，包括吸硫酸的吸管及盛水的器皿。

使用方法

试剂配制：

粉剂D，用时每支加纯水至5ml，现用现配，剩余的-20℃可存放一周；

粉剂E，用时每支加纯水至5ml，适当加热溶解，4℃冰箱保存；

试剂G，用时每支加纯水至25ml，室温保存；

粉剂H，用时每瓶加纯水至40ml溶解，溶解后4℃冰箱可保存一周；

粉剂I，用时每瓶加纯水至100ml溶解，室温保存；

0.5umol/ml 标准磷工作液的配制：

用时将试剂K储备液用纯水1:19稀释，即取0.5ml储备液加纯水定容至10ml；

定磷剂的配制：

按纯水：2.5mol/L硫酸：试剂H：试剂I=2:1:1:1的比例配制。

配好后的定磷剂应为浅黄色，若无色则试剂无效，若蓝色则为磷污染。

定磷剂需现用现配。

样本的前处理：

准确称取胃黏膜组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液，2500转/分，离心10min，取上清液，再用生理盐水5倍稀释成2%的浓度待测。

酶活性计算：

1. 定义：规定每小时每毫克组织蛋白的ATP酶分解ATP产生1umol无机磷的量为一个ATP酶活力单位，即微摩尔磷/毫克蛋白/小时（umol Pi/mgprot/hour）

2. 计算公式

H+、K+ -ATPase活力= 测定管OD值 – 对照管OD值X 标准管浓度 X 反应体系中 （U/mgprot） 标准管OD值 （0.5umol/ml） 样本稀释倍数（4.8）X 6 ÷ 待测样本蛋白含量（mgprot/ml）

注：

（1）. 反应体系中样本稀释倍数= 反应总体积 = 130+80+40+40+40+50+100 =4.8 倍取样量 100

（2）. 反应时间为10min，乘以6为1小时。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！