ATP酶检测试剂盒（总ATP酶）

产品概述

ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，它在物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要的作用。机体在缺氧及一些疾病状态下，此酶活力发生一系列改变，另外有些遗传疾病也与此酶活力有关。 ATP酶检测试剂盒(总ATP酶)是利用ATP酶可分解ATP生成ADP及无机磷的原理，通过测定无机磷的量来判断ATP酶活力的高低。 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

保存温度

2-8℃ 避光

注意事项

开盖后组份按要求条件保存。

有效期

6个月

检测方法

分光光度计

适用样本

组织、细胞样本

产品应用

分光光度计

仪器准备

1.分光光度计

2.恒温水浴锅

3.离心机

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

7.涡旋混匀器

试剂准备

1.纯水

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.试管

2.离心管

3.吸头

4.一次性手套

使用注意事项

1.试剂E乙液在冬天或4℃长时间保存可能会出现凝胶状物质，37℃溶解不了，可将其60℃左右水浴10分钟即可完全溶解；

2.试剂E甲液和乙液应防止磷污染；

使用方法

一、试剂配制

1．试剂C的配制：

使用前每支粉剂C加纯水1ml，充分溶解。

2．显色剂的配制：

取试剂E的甲液一瓶加入一瓶已预温好的试剂E的乙液中，充分混匀。

需提前0.5小时配制，2-8℃条件下可保存5天。

配好的显色剂的量够做13个管子。

如果样本量很少，所需的显色剂的量较少，可以按试剂E中的甲液：乙液=7:6的比例自行配制显色剂，用多少配制多少。（按比例配制显色剂要防止磷污染，最hao用专用的吸嘴）

3．0.1umol/ml标准磷工作液的配制：

使用前将10mmol/L标准磷储备液100稀释，即取0.1ml储备液加纯水至10ml；

4．0.02umol/ml标准磷工作液的配制：

将0.1umol/ml标准磷工作液用纯水稀释5倍，即取0.1umol/ml标准磷工作液1ml加纯水至5ml；

5．基液的配制：

将试剂A、B、C按260:80:80比例混合。需多少配多少，现配现用。

二、样本的前处理：

1. 组织的前处理：

准确称取组织重量，按重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液（即10%的匀浆上清液），再用生理盐水10倍稀释成1%，同时用考马斯亮蓝试剂测定组织蛋白浓度。

2．培养细胞的前处理：

将培养细胞消化，离心、弃上清，留下层细胞，每管加0.2~0.3ml生理盐水或匀浆介质制备成107/cm3细胞悬液，即107/ml，再进行破碎。

破碎细胞的方法有三种：

① 用匀浆器匀浆；

② 用超声粉碎器粉碎；

③ 反复冻融3次

第三种方法有时会影响酶活力；

制备好的细胞悬液不需要离心，同时用考马斯亮蓝试剂测定组织蛋白浓度。再将细胞匀浆液稀释成不同浓度进行预试，根据预试结果决定取样浓度。

3．计算：

（1）全血ATPase的计算

A：按全血体积计算：

定义：每小时每ml全血中ATP酶分解ATP产生1umol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。即umolPi/ml/hour全血T-ATPase活力（U/ml）=（测定OD-对照OD）÷（标准OD-空白OD）×标准品浓度（0.02μmoL/ml）×6×样品测试前稀释倍数×7.8

B：按血红蛋白量体积计算：

定义：每小时每g血红蛋白相当的红细胞中ATP酶分解ATP产生1umol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。即umolPi/gHb/hour全血T-ATPase活力（U/ gHb）=（测定OD-对照OD）÷（标准OD-空白OD）×标准品浓度（0.02μmoL/ml）×6×样品测试前稀释倍数×7.8÷ 血红蛋白含量（gHb/ml）

（2）组织、细胞中ATPase的计算

定义：每小时每mg组织（细胞）蛋白的组织（细胞）中ATP酶分解ATP产生1umol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。即umolPi/mgprot/hourATPase活力（U/mgprot）=（测定OD-对照OD）÷（标准OD-空白OD）×标准品浓度（0.02μmoL/ml）×6×7.8÷待测样本蛋白浓度（mgprot/ml）

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！